表达鸡柔嫩艾美耳球虫ama1蛋白的乳酸乳球菌免疫保护作用兽医学基础兽医学专业论文.docxVIP

ll删删唧删删姗l删删I姗枷ll删Y3022452 ll删删唧删删姗l删删I姗枷ll删 Y3022452 目 录 目 录 摘要 ．．I 英文摘要 III 1弓I言 ．1 1．1鸡球虫病的研究进展 ．1 1．1．1鸡球虫病的流行与危害 1 1．1．2鸡球虫生活史 ．．1 1．1．3抗鸡球虫免疫应答 2 1。2顶复门原虫入侵相关因子研究进展 ．．3 1．2．1顶复门原虫入侵宿主细胞机制 3 1．2．2顶复门入侵宿主相关蛋白 4 1．2．3顶体膜抗原1基因的研究进展 5 1．3鸡球虫疫苗研究进展 ．．6 1．3．1鸡球虫活疫苗 ．．6 1．3．2鸡球虫重组疫苗 7 1．4乳酸菌作为疫苗递送载体的研究进展 7 1．4．1乳酸菌作为表达载体的优势 8 1．4．2乳酸菌表达系统 ．9 1．4．3乳酸菌表达目的蛋白方式 9 1．4．4乳酸菌与黏膜免疫 ．10 1．5研究的目的和意义 1 l 2材料与方法 ．12 2。l实验材料 ．．12 2．1．1实验动物和虫种 12 2．1．2实验仪器 12 2．1．3菌株与质粒 1 3 2．1．4主要试剂 ．13 2．1．5主要溶液配方 13 2．2实验方法 15 2．2．1 EctoAMAl基因在大肠杆菌中诱导表达 15 2．2．2 EctoAMAl多克隆抗体制备及特异性检测 19 2．2．3 EctoAMAl基因在乳酸乳球菌中诱导表达 21 2．2．4实验动物免疫分组及取材 ．24 2．2．5外周血和脾脏中T淋巴细胞增殖功能变化 ．．25 2．2．6外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚型测定 25 2．2．7抗EctoAMAl蛋白特异性IgG抗体的ELISA检测 ．25 2．2．8免疫重组乳酸乳球菌后对球虫感染的保护效果 26 万方数据 东北农业大学农学硕士学位论文2．2．9数据统计与分析 东北农业大学农学硕士学位论文 2．2．9数据统计与分析 27 3结果 ．．28 3．1 EctoAMAl基因在大肠杆菌中诱导表达 ．．28 3．1．1 EctoAMAl基因的扩增 ．．28 3．1．2重组表达质粒pET30(a)．EctoAMAl鉴定 28 3．1．3 EctoAMAl基因在大肠杆菌中的诱导表达 30 3．2 EctoAMAl多克隆抗体的制备及检测 ．．30 3．2．1融合蛋白的纯化与复性 ．30 3．2．2多克隆抗体的效价和特异性检测 ．．31 3．3 EctoAMAl基因在乳酸乳球菌中诱导表达 ．．32 3。3。l重组乳酸乳球菌的鉴定 -32 3．3．2目的蛋白Western blot鉴定 35 3．4外周血和脾脏T淋巴细胞增殖功能变化 38 3．5外周血T淋巴细胞亚型数量变化 39 3．6外周血中IgG抗体含量动态变化 40 3．7重组乳酸乳球菌免疫对球虫感染的保护效果 ．41 3．7．1体重增重变化 41 3．7．2感染球虫后盲肠病变计分 ．4l 3．7．3卵囊排出减少率 42 3．7．4抗球虫指数ACI ．42 4讨论 ．．43 4．1柔嫩艾美耳球虫AMAl抗原性研究 43 4．2重组阳性乳酸乳球菌构建与目的蛋白表达 ．43 4．3重组乳酸乳球菌免疫后细胞免疫应答 ．44 4．4重组乳酸乳球菌免疫后体液免疫应答 ．44 4．5重组乳酸乳球菌的免疫保护作用 45 5结论 ．．46 致{射 ．．47 参考文献 ．48 攻读硕士学位期间发表的学术论文 55 万方数据 CONTENTSCoNTENTS CONTENTS CoNTENTS Abstract in Chinese ．I Abstract in English ．．III 1 Introduction ．．．1 1．1 Research progress of avian coccidiosis ． ． ． 1 1．1．1 Epidemiology and harm of avian eoccidiosis ．．1 1．1．2 Life cycle ofavian Eimeria ．．1 1．1．3 Immune response against avian Eimeria 2 1．2 Research progress ofApicomplaxa protozoa invade related factors ．．3 1．2．1 The mechanism of host cell invasion by apicomplexan protozoa 3 1．2．2 The related protein during invasion of apicomplexan protozoa 4 1．2．3 Research progress ofApical membrane antigen 1