石油烃降解菌群的分离鉴定及菌株间依存机制研究环境科学专业论文.docxVIP

复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 石 油 烃 降解 菌 群 的 分 离 鉴 定 及 菌 株 间 依 存 机 制 研 究 2 .1 菌 株 与 菌 种 来 源 - 18 - 2 .2 培 养 基 与 主 要 试 剂 - 18 - 2 .2 .1 培 养 基 - 18 - 2 .2 .2 主 要 试 剂 - 18 - 2 .3 仪 器 与 装 置 - 18 - 2 .3 .1 仪 器 - 18 - 2 .3 .2 生 物 滴 滤 池 装 置 - 19 - 2 .4 实 验 操 作 方 法 - 19 - 2 .4 .1 石 油 烃 降解 菌 群 在 生 物 滴 滤 池 上 挂 膜 及 对 柴 油 的 降 解 - 19 - 2 .4 .2 高 效 石 油 烃 降 解 菌 和 高 效 生 物 表 面 活 性 剂 产 生 菌 的 分 离 和 筛 选 ...- 2 0 - 2 .4 .3 菌 体 形 态 及 生 理 生 化 特 性 - 20 - 2 .4 .4 菌 株 16 S rD N A 序 列 的 测 定 - 20 - (1) 菌株基 因组 D N A 提取 - 20 - (2)PC R 扩增菌株 16S rD N A -2 1 - 2 .4 .5 菌 株 系 统 发 育 树 地 位 的 确 定 - 22 - 2 .4 .6 高 效 石 油 烃 降 解 菌 X 2b 对 柴 油 降解 率 的环 境 影 响 因 素 - 22 - 2 .4 .7 发 酵 条 件 对 高 效 表 面 活 性 剂产 生 菌 X iA -2 菌 体 生 长 及 产 表 面 活 性 剂 的 影 响 - 22 - 2 .4 .8 生 物 表 面 活 性 剂 的 发 酵 生 产 - 23 - 2 .4 .9 生 物 表 面 活 性 剂 的粗 提 和 定 量 - 23 - 2 .4 .10 X 2b 对 正 十 六 烷 的 降 解 - 23 - 2 .4 .1 1 X 2b 代 谢 产 物 的提 取 及 衍 生 化 - 23 - (1) 代谢产物的提取 - 23 - (2) 代谢产物 的衍 生化操 作 - 24 - 2 .5 分 析 测 试 方 法 - 2 4 - 2 .5 .1 生 物 滴 滤 池 中 柴 油 的 提 取 与 定 量 - 24 - 2 .5 .2 样 品 G C /M S 分 析 的 预 处 理 及 进 样 条 件 - 2 4 - (1) 生物滴滤池 中柴油 降解前后样 品分析 - 24 - (2) X 2b 降解前后石 油烃 的提取 与定量 - 24 - (3) 生物表面活性剂脂肪酸部分 的测定 ： - 25 - (4)X 2b 代谢产物 的 G C /M S 测定 ： - 25 - 2 .5.3 X iA -2 菌 体 生 物 量 的测 定 - 2 6 - 2 .5 .4 发 酵 液 表 面 张 力 的测 定 - 2 6 - 2.5.5 薄层层析法(T L C )对生物表面活性剂 定性分析 -26 - II 复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 石 油 烃 降解 菌 群 的 分 离 鉴 定 及 菌 株 间 依 存 机 制 研 究 2 .5 .6 生 物 表 面 活 性 剂 的液 相 色 谱 分 离 纯 化 与 制 备 - 2 6 - 2 .5 .7 生 物 表 面 活 性 剂 的 L C /M S /M S 结 构 鉴 定 - 2 7 - (1) 分子量的测定 ： -27 - (2) 肽链部分的测定： -27 - 2 .6 烷 烃 羟 化 酶 遗 传 学 实 验 材 料 与 方 法 - 27 - 2 .6 .1 培 养 基 及 试 剂 - 2 7 - (1) 培养基 - 27 - (2) 试剂及试剂盒 - 28 - 2 .6 .2 仪 器 - 2 8 - 2 .6 .3 实 验 方 法 - 2 8 - (1) 柴油降解酶基 因分析与筛选 -28 - (2) 降解酶基 因扩增 的引物 设计 -29 - (3)B acillus cereus X 2b 基因组 D N A 的提取 -29 - (4)B acillus cereus X 〗b 降解菌质粒 的提取 - 30 - (5)B acillus cereus X 2b 中 alkB 和 C Y P 153A 基 因的克隆 - 30 - (6) 测序及生物信息学分析 - 33 - 第 三 章 高 效 石 油 烃 降解 菌 的筛 选 、鉴 定 及 柴 油 降解 环 境 影 响 因 素 分 析 .......- 34 - 3 .1 高 效 石 油 烃 降解 菌 的分 离 和 筛 选 - 34 - 3 .2 X 2b 的菌 落 形态