镉诱发子痫前期及其干扰胎盘糖皮质激素分泌的研究妇产科专业论文.docxVIP

温州医科大学博士学位论文目 温州医科大学博士学位论文 目 录 中文摘要 ．．2 Abstract ．．5 引 言 1 O 第一部分镉与子痫前期发生的研究 12 材料与方法 ．12 结果 19 分析与讨论 27 第二部分 镉对胎盘皮质激素合成的影响和调节机制 32 材料与方法 32 结果1：口木 ‘+‘+44 分析与讨论 54 小结 61 参考文献 ．62 致谢 7 1 综j苤 72 万方数据 温州医科大学博士学位论文中文摘要 温州医科大学博士学位论文 中文摘要 镉诱发子痫前期及其干扰胎盘糖皮质激素分泌的研究 实验背景 子痫前期(Preeclampsia，PE)是以高血压、蛋白尿为主要表现的妊娠期特有 的疾病，和患者的经济地位、心理、营养状态、环境与遗传因素相关。子痫前期 严重影响母儿健康，是围产期造成孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一，且目前 没有特别有效的防治方法。子痫前期其病因不明，子痫前期的孕妇分娩后相关症 状迅速消失，提示胎盘系子痫前期发生的重要“基地”。 镉(Cadmium，Cd)是一种非常重要的工业、环境毒物，具有内分泌干扰物 的特性。镉可以通过增加氧化应激，影响内皮细胞功能，促进炎症反应等各种作 用引起血压升高。胎盘是镉毒性的一个重要的靶器官，但是并不容易穿过胎盘到 达胎儿，该金属在胎盘中高浓度聚集。胎盘是个临时的内分泌器官，所以本研究 通过镉对胎盘内分泌功能特别是皮质激素分泌与调节的干扰，了解镉与子痫前期 的关系以及它在子痫前期发病方面的特殊的毒理作用。 实验目的 采用不同剂量镉给孕鼠腹腔注射，通过镉中毒孕鼠血压、蛋白尿等指标的检 测和胎盘、肾等各脏器的病理学检查，以及镉对胎鼠生长发育的影响，了解镉对 孕鼠的生殖毒性。临床研究比较镉在子痫前期及正常妊娠母血及脐血的浓度的差 异。从组织，细胞和分子水平系统探讨镉通过促进胎盘皮质激素合成诱发子痫前 期和胎儿宫内生长迟缓(Fetal growth restriction，FGR)的关系，及其作用与调 节机制，为镉对孕期胎盘内分泌干扰毒性提供理论基础。 实验方法 第一部分：镉与子痫前期发生的研究 体内实验：SD大鼠孕4天至19天腹腔注射不同浓度的氯化镉(0,0．25， O．5mgCd2十／kg／d)，用BP．98A血压仪测量大鼠血压的变化，BCA蛋白分析试剂盒 检测蛋白尿改变，测量了解胎鼠的生长发育情况。HE染色法观察胎盘、肾脏。 肝脏、脑的病理变化，并用透射电镜观察胎盘滋养细胞的超微结构。 临床研究：收集子痫前期临床病例，并按是否合并FGR分组。用电感耦合 等离子体质谱法(ICP．MS)测量母血以及胎儿脐血中的镉浓度，与正常妊娠妇女对 照，并同时测量血中其他微量元素如：镁、钙、铁、锌的浓度。 第二部分：镉对胎盘皮质激素合成的影响和调节机制 万方数据 温州医科大学博士学位论文体内实验：动物分组及染毒同第一部分，用敏感的ELISA法测定孕鼠血、 温州医科大学博士学位论文 体内实验：动物分组及染毒同第一部分，用敏感的ELISA法测定孕鼠血、 胎盘及胎儿血中皮质酮、孕酮的浓度。用RT-PCR法测量胎盘组织中的皮质激素 合成通路StAR、CYPl 1A1、3B．HSD2、CYP21、CYPl 181基因的表达，免疫组 化法测量CYPllBl蛋白在胎盘的定位和表达，并测量糖皮质激素局部主要调节 因子1113．HSD、糖皮质激素受体的基因及蛋白的表达。 体外实验：镉对JEG．3细胞进行染毒，染毒剂量分别为0(对照组)、0．25、 0．50、1．009M。染毒结束后MTT法检测细胞相对活力，用ELISA法测定培养基 中皮质醇和孕酮分泌水平。RT-PCR法和Western blot法测量镉刺激后皮质醇合 成的关键酶CYPllAl、CYPllBl基因及蛋白水平的表达。培养液中分别依次加 入孕酮为底物和甲吡酮作为拮抗剂，了解镉作用于皮质激素合成酶的途径。在培 养液分别依次加入ACTH和8．溴．cAMP，了解局部皮质激素合成的调节机制。 RT-PCR法和Western blot法测量染镉后滋养细胞11 13-HSD2和糖皮质激素受体的 表达变化。 实验结果 1。镉诱导大鼠的子痫前期临床症状 用0．5mg／kg／d剂量镉的大鼠于孕10．13天血压逐渐升高，高于对照组及非孕 同等剂量组(p0．01)；24小时蛋白尿水平也高于对照组及非孕组(p0．01)；胎 鼠平均出生体重低于对照组(pO．05)。 2．镉诱导的子痫前期大鼠的胎盘、肾脏、肝脏、脑的病理损伤 镉造成的病理损伤表现为胎盘绒毛血管扩张充血、迷路区血管间膜明显增厚 以及广泛纤维蛋白沉积，见炎症细胞浸润。肾小球内皮细胞肿胀和肾间质小动脉 管壁明显增厚并伴有炎症细胞聚集。肝细胞浊肿，甚至出现局灶性坏死。脑血管 充血、灶区出血、脑水肿，脑神经