病毒感染检查方法与防治原则.pptVIP

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医 学 微 生 物 学(Medical Microbiology) 第二篇 病毒学 第二十四章 病毒感染的 检查方法与防治原则 教 学 目 标 熟悉: 人工主动免疫和人工被动免疫的常用生物制品。 了解: 病毒感染的实验室诊断方法。有效抗病毒药物的抗病毒机制及应用价值。 思考: 病毒如此之小和活细胞内寄生,我们如何分离培养及检查? 血清学诊断和分子生物学检查的理论基础是什么? 可通过什么方式预防病毒的感染? 对抗病毒有招--巴斯德在1889年发明了狂犬病疫苗 病毒的面貌清晰地呈现在人们的眼前仅仅百余年的历史,但明确的病毒致病的记载早在四百多年前就有了。早在1566年,疯狗咬人致病的案例已经被记录下来,但直到1885年,人们还不知道狂犬病到底由什么引起。 在细菌学说占统治地位的年代,巴斯德的试验为狂犬病的防治开辟了新的路径。巴斯德发现,将狂犬病延髓提取液多次注射兔子后,再将这些毒性已递减的液体注射狗,狗就能抵抗狂犬病毒的侵染。 1885年的一天,人们把一个被疯狗咬过的9岁男孩迈斯特尔送来求救,巴斯德给这个孩子注射了毒性减到很低的提取液,然后再逐渐用毒性较强的提取液注射。巴斯德的方法拯救了男孩的生命。 第一节 病毒感染的检查 检 测 内 容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类:如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似,但应注意: 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存,尽快送检 3.血清学诊断采双份血清 二、病毒的分离与鉴定 (一)病毒分离培养方法类型 细胞培养(cell culture) 鸡胚接种(egg inoculation) 动物接种(animal inoculation) 标本 无菌处理 细胞培养 鸡胚培养 动物接种 指标阳性 指标阴性 病毒鉴定 盲传2~3代 指标阴性 病毒阴性 一般程序 1.动物接种 最原始 应用:尚无敏感细胞的病毒培养 动物:兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点:结果易观察,可建立动物模型 缺点:有饲养条件要求,费用高,动物体内常带有潜伏病毒 绒毛尿囊膜(allantocherion) 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔(allantoic cavity) 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒 卵黄囊(yolk sac) 嗜神经病毒 2.鸡胚接种 孵化9~14天的鸡胚 3.细胞培养 在一定条件下用离体的活组织或活细胞培养病毒的方法 证实病毒存在的方法: ① CPE ② 红细胞吸附及凝集 ③ 干扰现象 ④ pH值改变 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 如腺病毒等多数病毒 腮腺炎病毒感染细胞 红细胞吸附(hemadsorption) HA+红细胞表面HA受体→细胞吸附 病毒胞膜表面血凝素(HA) + 相应抗体+红细胞→吸附抑制 红细胞吸附抑制试验 干扰现象(interference) 风疹病毒+人胚肾细胞 病毒增殖,CPE(-) 埃可病毒+人胚肾细胞 病毒增殖,CPE(+) +人胚肾细胞 风疹病毒 埃可病毒 CPE(-)—风疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+) (二)病毒的鉴定 1.形态学鉴定 电子显微镜 2.病毒的血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 血凝抑制试验、免疫标记 3.病毒分子生物学鉴定 三、病毒感染的诊断 (一)病毒形态学鉴定 电子显微镜:设备、操作复杂,应用受限 光学显微镜:可见大病毒(痘类病毒)或包涵体,对一般病毒检测意义不大 (二)免疫学检查法 检查病毒抗原 ELISA 血凝抑制试验、中和试验 检查病毒特异性IgM 风疹病毒、甲型肝炎病毒等 (三)检查病毒核酸 核酸杂交技术 PCR技术 第二节 病毒感染的防治原则 一、人工主动免疫常用生物制品 灭活疫苗、活疫苗; 基因工程疫苗; 亚单位疫苗; 核酸疫苗 二、人工被动免疫常用生物制品 免疫血清 血清丙种球蛋白 细胞因子等 三、病毒感染的治疗 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗 抗病毒 化学制剂 反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶(ribozyme) 核苷类药物 碘苷 阿昔洛韦 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 总结 病毒感染的检查方法与一般程序。 病毒感染的特异预防 病毒感染的治疗

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