4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果.PDF

·172 · 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第50 卷 第1 期 2019 年1 月 4 种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果 1, 2 1, 2 1, 2 1, 2 1, 2* 柴冰阳 ，陈泽慧 ，张闪闪 ，应 雪 ，张 波 1. 新疆植物药资源利用教育部重点实验室，新疆 石河子 832002 2. 石河子大学药学院，新疆 石河子 832002 摘 要：目的 研究4 种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果，对紫草萘醌为代表的天然色素在 细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法 将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病 HL-60 细胞和低敏 感株人非小细胞肺癌A549 细胞体外共培养，通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B （SRB）法、Cell Counting Kit-8 （CCK-8）法和 四甲基偶氮唑盐（MTT ）法进行平行实验，测定紫草素在0.4～128 μmol/L 抑制细胞生长的量效关系曲线。结果 台盼蓝法、 SRB 法、CCK-8 法、MTT 法测得紫草素对HL-60 细胞的半数抑制浓度 （IC50 ）分别为0.57、0.77、1.36、1.01 μmol/L，对 A549 细胞的IC50 分别为6.30、10.38、13.48、15.24 μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32 μmol/L 以下时，4 种检测方法得到 其对2 种细胞的抑制率均呈线性增长，超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB 法结果一致性良好，而MTT 法与CCK-8 法测得的抑制率较低。对于HL-60 细胞，紫草素12.8 μmol/L 时，CCK-8 测得抑制率为81% ，台盼蓝法为96% ；对于A549 细胞，紫草素128 μmol/L 时，MTT 法测得抑制率为89% ，台盼蓝法为99% 。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600 nm 存在重叠，最大重叠峰在550～570 nm，CCK-8 试剂与紫草素对HL-60 细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度 紫草素几乎完全杀死板孔内细胞，相比对照组差异显著，但MTT 法和CCK-8 法结果出现假阴性。结论 紫草萘醌为代表的 天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT 法和CCK-8 法，推荐使用SRB 法和台盼蓝法。 关键词：紫草素；细胞毒活性评价；四甲基偶氮唑盐法；磺酰罗丹明B 法；CCK-8 法；台盼蓝法 中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2019)01 - 0172 - 06 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2019.01.026 Evaluation effects of four cytotoxicity methods on in vitro inhibition of shikonin against tumor cells CHAI Bing-yang1, 2, CHEN Ze-hui1, 2, ZHANG Shan-shan1, 2, YING Xue1, 2, ZHANG Bo1, 2 1. Key Laboratory of Xinjiang Endemic Phytomedicine Resources, Ministry of Education, Shihezi 832002, China 2. College of Pharmacy, Shihezi University, Shihezi 832002, China Abstract: Objective To study the effects of four cytotoxicity evaluation methods on the inhibition rate of shikonin (SK) in vitro, and to compare the pseudo-negative phenomenon often found in the evaluation of cytotoxic activity of natural pigments represented by naphthoquinones in Lithospermum erythrorhizo