异源冷冻精子诱导大菱鲆的雌核发育苏鹏志黄海水产研究所.PDF

第15卷第5期 中国水产科学 Vo l . 1 5 N o . 5 2 0 0 8 年9 月 Journal of Fishery Sciences of China September 2008 1 2 2 2 2 3 3 ， ， ， ， ， ， (1. 中国海洋大学 海洋生命学院，山东 青岛 266003 ；2. 中国水产科学研究院 黄海水产研究所，农业部海洋渔业资源可持续利 用重点开放实验室，山东青岛 266071 ；3. 山东莱州明波水产有限公司，山东 莱州 266031) ：采用冷冻保存的鲈 (Lateolabrax japonicus) 精液不经紫外线照射直接与大菱鲆 (Scophthalmus maximus) 卵进行 杂交，可以刺激大菱鲆卵进行胚胎发育，胚胎发育率 ( 发育至原肠期后胚胎成形的卵占总卵数的百分比 ) 可达 79.1% 。 通过与精子照射组单倍体发育过程等对比观察发现，杂交后代为大菱鲆的单倍体。如果在“受精”后 2~10 min 内将大 菱鲆卵在 0~6 ℃冷休克处理 10~50 min，均能诱导卵子染色体加倍。对冷休克处理条件的筛选结果表明，在 0 ℃条件下， 卵子在受到鲈鱼精子刺激后 6 min 开始进行冷休克处理 25 min ，二倍体孵化率 ( 雌核二倍体苗占受精卵的百分比 ) 最 高，可达 34.8 % 。通过对各实验组卵发育情况的跟踪观察，发现单倍体与雌核发育二倍体在发育过程中有明显的差异， 这种差异最早出现在 8 细胞期。单倍体胚胎头部发育不正常，眼泡较小，身体短且扭曲较严重，从肌节期开始沉积大量 的黑色素颗粒。仔鱼孵化 1 周内单倍体即全部死亡。与正常二倍体对照组相比较，证明所得正常形态仔鱼即为雌核发 育二倍体。[ 中国水产科学，2008，15(5)：715-721] ：大菱鲆；鲈；精子；雌核发育；冷休克 ：S917 　　　： 1005 8737 2008 A 　　　 ： - -( )05-0715-07 雌核发育是遗传物质均来源于母本的繁殖方 现已达到较大的工厂化养殖规模，是中国北方沿海 式 [1-2] 。进行人工诱导雌核发育，不仅可以迅速获 海水养殖的主要品种。但是，雌性大菱鲆比雄性生 得基因纯合，使优良性状以最快的速度达到纯合固 长速度快大约 30% 以上，且随养殖时间的延长，生 定，还可以进行性别控制，达到培育单性苗种的目 长速度差异越大。近几年，养殖大菱鲆出现了明显 的。这对于雌雄个体差异较大的物种或某一性别 的性状衰退及抗病力下降等问题。因此，培育全雌 成熟过早的物种尤为重要。 性大菱鲆对于得到优良遗传性状的亲鱼，提高大菱 鱼类雌核发育的研究始于 20 世纪 50 年代，在 鲆的生长速度、抗病性以及提高经济效益具有重要 随后几十年里发展迅速。尤其是近 20 年，人工诱 意义。在关于鱼类雌核发育的研究报道中，几乎全 导雌核发育一直是鱼类遗传育种研究中的热门领 部都是通过对同源或者异源精子的遗传物质进行 域 [1-3] 。国际上已先后在鲤科、鲑科、鲽科、鳅科和 紫外照射灭活，然后用灭活精子刺激卵子来实现雌 鲷科等重要经济鱼类中开展了人工雌核发育的研 核发育。这种方法的缺点是，对精子进行紫外照射 究，并获得成功。国内对淡水鱼类雌核发育研究 会导致卵子受精率大幅下降，以致雌核二倍体孵化 开展的较多，且取得了较大进展 [4] 。而对于海水 率大幅下降；紫外照射处理同源精子，并不能保证 Paralichthys 所有精子的遗传物质全部被灭活。因此所得后代仔