华北地区棉铃虫对bt棉花抗性监测及抗性种群的蛋白质营养利用研究分析-农业昆虫与害虫防治专业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否 如需必威体育官网网址，解密时间 年 月 目 是否必威体育官网网址 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： 艚友 时间： 加／尹年 厂月 仞日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：必威体育官网网址学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交必威体育官网网址的论 文)在解密后适用于本授权书。 学位论文作者签名：安静杰 导师签名：凌一、川手 签名日期：仞胖年厂月仍日 签名日期：功7笋年歹月矽日 目录摘要 目录 摘要 ．i Abstract ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．iii l前言 一l 1．1转基因作物应用 1 1．2田问抗性现状 3 1．2．1初期抗性 3 1．2．2早期预警 3 1．2．3实质性抗性 4 1．3 Bt抗性机理 9 1．3．1蛋白酶调控的Bt抗性 10 1．3．2受体调控的抗性 一11 1．3．3 ABCC2 transporter调控的Bt抗性 ．12 1．4昆虫的营养代谢 ．13 1．5研究的目的和意义 ．15 2华北棉铃虫抗性监测 I 7 2．1材料与方法 ．17 2．1．1抽样地点 一17 2．1．2实验室品系 一19 2．1．3田间种群的采集 ．．19 2．1．4 Bt毒蛋白 一20 2．1．5 F1代生测方法 20 2．1．6 F2代生测方法 20 2．1．7数据分析 ．．20 2．2结果与分析 ．2 1 2．2．1田问种群的采集 ．．2l 2．2．2室内品系生物测定 ．．21 2．2．3 F1代生测 22 2．2．4 F2代生测 28 2．2．5 2．2．5 FI代和F2代幼虫的RADR相关性分析 ．28 2．2．6华北棉铃虫抗性基因频率评估 ．．3 l 2．2．7华北棉铃虫抗性变化趋势 一3l 2．3讨论 33 3 DNA分子检测棉铃虫抗性基因 36 3．1材料与方法 ．39 3．1．1样品采集 一39 3．1．2 DNA提取 ．40 3．1．3 PCR检测 40 3．2结果与分析 ．43 3．3讨论 45 4抗性棉铃虫蛋白质营养代谢的研究 47 4．1材料与方法 ．48 4．1．1供试虫源 一48 4．1．2仪器设备 ．．48 4．1．3全纯人工饲料的配制 一48 4．1．4不同蛋白浓度的饲料对幼虫生长发育的影响 ～49 4．1．5不同蛋白浓度的饲料对幼虫化蛹及存活的影响 ．．49 4．1．6数据分析 一50 4．2结果与分析 ．50 4．2．1不同蛋白浓度的饲料对幼虫生长发育的影响 。50 4．2．2不同蛋白浓度的饲料对幼虫化蛹及存活的影响 一54 4．3讨论 56 5抗性棉铃虫蛋白酶活性的研究 58 5．1材料与方法 ．58 5．1．1供试虫源 一58 5．1．2相关试剂的配制 一58 5．1．3中肠蛋白酶液的提取 ．．59 5．1．4中肠提取液可溶性蛋白含量测定 ～60 II 5．1．5总蛋白酶活性测定 5．1．5总蛋白酶活性测定 ～60 5．1．6类胰蛋白酶活性测定 一60 5．1．7类胰凝乳蛋白酶活性的测定 ～60 5．1．8数据分析 一60 5．2结果与分析 ．61 5．2．1棉铃虫幼虫中肠总蛋白酶的活性 ．．61 5．2．2棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的活性 一65 5．2．3棉铃虫幼虫中肠类胰凝乳蛋白酶的活性 ．．69 5．3讨论 7：； 6全文总结 75 6．1主要结论 ．75 6．2创新点 ．．76 6．3亟待开展的工作 ．76 参考文献 ．77 致谢 ．96 ⅡI 摘要从细菌苏云金芽孢杆菌(Bacillus 摘要 从细菌苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis