2014小反刍兽疫病毒Tibet07株F蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定.PDFVIP

中国畜牧兽医 2014年第 41卷第 8期 生物技术 ·29 · 小反刍兽疫病毒 Tibet07株 F蛋白在昆虫 细胞 中的表达及其抗原性鉴定 赵文年l-。，王清华 ，刘春菊 ，王淑娟 ，雷程红 ，包静月 ，王志亮 (1．中国动物卫生与流行病学 中心，山东青岛 266032；2．新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830000) 摘要 ：应用 Bac—tO—Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(pestedespetitsruminantsvirus，PPRV)西藏分离株 Tibet O7的融合蛋 白，并对其抗原性进行鉴定 。扩增 PPRVTibet07株融合蛋 白基 因，克隆至 pFastBac／CT—TOPO载体 中，构建重 组穿梭质粒 pFastBacCT—PPRV—F，构建重组杆状病毒 Bacmid—PPRV-F，转染 sf9细胞 ，获得重组杆状病毒 。通过 SDs 鉴定 F蛋白的表达 ，利用 Westernblotting和间接免疫荧光鉴定 F蛋 白的抗原性。表达的F蛋 白在分子质量约 59ku处可见 特异蛋白条带 。重组杆状病毒 Bacmid—PPRV-F感染的 sf9细胞可与抗 PPRV 阳性血清发生特异性反应 。使用 Bac—tO—Bac杆 状病毒表达系统表达 了PPRV西藏分离株 Tibet07的融合蛋 白，为进一步研究其生物学功能及研制小反刍兽疫 的亚单位疫 苗奠定了基础 。 关键词：小反刍兽疫 ；F蛋 白；杆状病毒表达系统 中图分类号 ：$852．65 9．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671-7236(2014)08—0029—05 小反刍兽疫 (pestedespetitsruminants，PPR) 2007)，2013年 11月～2O14年 1月 ，中国新疆暴发 是山羊、绵羊和野生小反刍兽的一种急性病毒病 ，以 PPR疫情 。通过扑杀、大规模免疫 、检疫和移动控 发热 ，眼、鼻分泌物 ，胃炎，腹泻和肺炎为特征。PPR 制 、野生动物控制等综合防控措施 ，上述疫情得到有 是一种地方性流行疫病 ，先后在非洲 、中东和亚洲发 效控制 。 生和流行 (Dhar等，2002)。中国西藏 阿里和那 曲地 小反刍兽疫病毒 (pestedespetitsruminants 区分别于 2007年和2008年暴发 PPR(王志亮等， virus，PPRV)基 因组为单股 负链 RNA，大小为 15948个核苷酸 ，基因组 3末端为前导序列 ，5末端 收稿 日期 ：2014—01—14 为尾随序列 ，6个基 因排列顺序为 3LN—P—M—F—H— 作者简介：赵文年 (1988一)，男 ，新疆人 ，硕士 ，研究方 向：预防兽 医学 。 L一5，依次编码 6个结构蛋 白：核衣壳蛋 白(N)、磷 王清华 (1979一)，女 ，山东人 ，硕士 ，研究方 向：预防兽 蛋 白(P)、基质蛋 白(M)、融合蛋 白(F)、血凝 蛋 白 医学 。 (H)和大蛋白(L)，P基因还编码 2个非结构蛋白C 赵文年和王清华对本文具有 同等贡献 ，并列为第一 作者 。 和V(Bailey等 ，2005)。F基因总长度为 2411个核 通信作者 ：包静月 。E—mail：baojingyue@cahec．CFI 苷酸，开放阅读框长度为 1641个核苷酸，编码 546 王志亮 。E—mail：wangzhiliang@cahec．cn 个氨基酸，F蛋 白