视网膜母细胞瘤中rassf1a基因启动子的甲基化状态及5-aza-cdr的去甲基化抑瘤来作用-眼科学 视网膜病专业毕业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 第一章RASSFlA和DAPK基因启动子在RB中的 甲基化状态 目的 研究肿瘤抑制基因RAS相关区域家族1A(Ras．Association domain family 1，isoform A，RASSFlA)和死亡相关蛋白激酶 (Death．Association．Protein．Kinase，DAPK)基因启动子在视网膜母 细胞瘤(retinoblastoma，RB)组织和患者外周血中的甲基化状态。 方法 应用甲基化特异性PCR(methylated—specific polymerase chain reaction，MSP)技术检测28例视网膜母细胞瘤组织和9例RB患者外周 血中RASSFIA和DAPK基因启动子的甲基化状态，并分别比较各组间 甲基化率的差异。 结蟹 ：日7卜 1．RB组织中RASSFlA基因启动子的甲基化率为60．7％(17／28)， 高于正常人视网膜组织或瘤旁组织，差异有显著的统计学意义 (Pn0／)o 2．单侧RB组织的甲基化率为72．7％(16／22)高于双侧16．7％(1／6)， 差异有统计学意义(P=0．022)。 3．2例(2／9)RB患者外周血中检测到地峪SFlA基因启动子的高 硕士学位论文 中文摘要 甲基化，而5例(o／5)健康志愿者外周血中均未发生甲基化，两者相 比较甲基化差异无统计学意义。 4．DAPK基因启动子在RB组织及患者外周血中均未发生甲基化。 结论 RASSFlA基因启动子高甲基化是RB中一常见频发的表观遗传修 饰。 关键词 视网膜母细胞瘤，启动子高甲基化，RASSFlA，DAPK Ⅱ 硕士学位论文 第二章5-Aza．CdR对RB细胞RASSFlA基因启动子 去甲基化的转录调节作用 杪 目的 研究5．司2．脱氧胞苷c5．Aza．2．de。xycy。tdme，5．恕a．cdR，对 视网膜母细胞瘤HXO．RB44细胞株RASSFlA基因启动子去甲基化转 录调节作用的量效和时效关系。 方法 将人视网膜母细胞瘤HXO．RB44细胞，随机分组：A组：实验对 照组(O．0125％DMSO组)；依5-Aza．CdR不同作用浓度分为以下5 组：B：O．1,umol／l组；C：0．5．umol／1组；D：1．0／zmol／1组；E．-5．0,umol／l 组；F：10．0,umol／1组，于4d后，应用MSP方法检测不同浓度作用后 RASSFlA启动子甲基化状态的差异；应用RT-PCR方法检测不同时 间点(1-7天)完全去甲基化的5．0,umol／l浓度药物作用时 RASSFlAm对峪的表达差异；应用细胞免疫化学法检测RASSFlA 蛋白的表达情况。 争士??当日木 1．在0．5,umol／1—5．0,umol／1浓度范围内，随着药物浓度的增加， RASSFlA甲基化产物电泳条带的光密度值(OD)逐渐降低，未甲基 化产物的OD值逐渐增高并达高峰，各组间比较差异有统计学意义 (PD05)。 2．经5．0,umol／l 5-Aza．CdR作用5天后，沉默表达的RASSFlA III 硕士学位论文 mRNA重新表达并明显高于实验对照组和第1、2、3、4天(Pa弧)。 3．经5．0／比mol／l 5-Aza—CdR作用5d后，RASSFIA蛋白阳性表达， 而实验对照组不表达。 结论 1．视网膜母细胞瘤HXO．RB44细胞株中RASSFlA启动子呈甲基 化状态，RASSFlA蛋白表达沉默。 2．5-Aza-CAR在0．5#mol／l-5．0pmol／1浓度范围内可以逆转 RASSFlA基因启动子的甲基化状态，呈浓度依赖性，在5．0／zmol／1 浓度作用5d后可以恢复该基因稳定的再次表达。 3．RASSFlA基因启动子高甲基化可能成为RB肿瘤治疗的有效 靶点。 关键词 5．氮杂2．脱氧胞苷，视网膜母细胞瘤，RASSFIA,启动子高甲基化 IV 硕士学位论文 中文摘要 第三章5-Aza．CdR抑制体外培养的RB细胞的生长 目的 观察5．Aza．CdR对视网膜母细胞瘤HXO．RB44细胞株的生物学行 为影响，探索RB[I中瘤治疗的新方法。 方法 实验分组同前，5-Aza．CdR干预后，应用MTr比色法检测各时间 点(24h、48h、72h、96h、120h、144h)各组细胞吸光度值(A)绘制 细胞生长曲线；流式细胞术检测各时间点各组细胞生长周期及凋亡的 变化。 多士田皇口木 1．细胞增殖的变化：经5．0#mol／l 5-Aza—CdR诱导96h后，HXO—RB44 细胞增殖减少，细胞生长速度明显下降，差异有统计学意义(Pn仿)。 2．细胞生长周期和凋亡的变化： 5．0,umol／1 5-Aza．CAR诱导96h、 144h后Go／G1期细胞比例增