HIV1单克隆中和抗体Y98的抗病毒活性和机制研究.docx

中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 博士学位论文 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 学位论文作者签名：稍孀 签字日期： 沙／J一年／，月，≥日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解j曼立迹塑匡堂瞳有关保存、使用学位论文的管理 办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查 阅和借阅。本人授权j＆立拯塑医堂瞳可以将学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：奔圣爱媛 导师姥／1巧气勘 签字日期： 沙眸IJ月亿日 签字日期： 约，，年I／月／≯目 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 博士学位论文 HIV-1单克隆中和抗体Y498的抗病毒活性和 机制研究 Research on antiviral activity and mechanism of HIV-1 monoclonal neutralizing antibody．Y498 3 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 博士学位论文 目 录 图表 ．．6 摘要 ～6 Abstract．． ．．．．．．．．，．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．． ．． ． ．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8 前言 ．．1 O 1实验材料 一23 1-1相关细胞、菌株及辅助噬菌体 23 1．2本实验相关抗体和抗原 23 1．3用于HIV一1假病毒包装的相关质粒 ．24 1．4一l物 25 1．5常用溶液和培养基 一26 1．6二1二要仪器设备 一27 2实验方法 ．．29 2．1 Y498抗体的基因序列分析 ．29 2．2 Fab Y498的表达及纯化 一29 2．3 ELISA检测Fab Y498交叉反应活性 ．30 2．4 Fab Y498的中和活性检测 一30 2．5 Y498仝分子IgG表达载体的构建 ．3 I 2．6 Y498(Y498 IgG)的表达及纯化 ．．33 2．7 ELISA检测抗体Y498交叉反应活性 ．33 2．8表面质子共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)实验 ： 34 2．9 Y498与去构象HIV-1 gpl20的结合反应 ．．35 2．10竞争ELISA(Competition ELISA) ．35 2．1 l Hlv一1假病毒的制备 ．36 2．】2基于HIV．I假病毒的中和实验 ．36 2．13 Y498洲-J源建模和分子对接 37 2．14噬菌体表面展示肽库筛选Y498所识别的模拟且太 ～39 2．15预测Y498所识别的表位 一42 2．16点突变分析预测的Y498结合位点 。43 2．1 7 Capture ELISA检测Y498的识别表位 44 2．】8 Y498对筛选到的点突变进行中和反应 45 2．19 Y498所识别表位的结构展示及分析 45 3实验结果 46 3．1 Y498 q变区序列分析 ．46 3．2 Fab Y498抗体的Ni杜亲和纯化 47 3．3 Fab Y498反应活性的检测 一47 3．4 Fab Y498抗体中和活性的鉴定 ．．48 3．5 Y498(Y49SlgG)(向载体构建 49 3．6 Y498的结合反应 ．49 3．7 Y498的表达纯化 ．50 3．8 Y498的交叉反应 ．50 3．9表面等离了共振(SPR实验) 5 1 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 博士学位论文 3．10 Y498IgG具有广谱的中和活性 ．： 52 3．1l Y498识别位于gpl20上的CD4结合区域的构象表位 ．56 3．】2 Y498的生物信息学分析 58 3．13 Y498的表位筛选和预测 6l 3．14突变对入侵能力的影响 62 3．15突变对结合能力的影响 一62 3．1 6 Y498对突变体的中和耐受 63 3．17 Y498识别表位的结构展示 ．．65 4讨论 ． ． ． 67 d、结 ． ． ． ．