GB/T 18647-2002动物球虫病诊断技术.pdf

GB/r18647-2002 前 言 球虫病(coccidiosis)是多种动物的一种重要寄生虫病，对家畜、家禽、鱼类和野生动物等均有不同程 度的危害，各国均有发生。本病对家禽和兔危害较大，急性暴发的死亡率可超过3000;其次是猪、牛、羊 等大家畜，急性感染常引起下痢，生长严重受阻;也偶有鱼类和野生动物发生球虫病的报道。特别在集约 化的养殖中，若控制不严，会造成重大的经济损失。 本病的病原为泡子虫纲(Sporozoa)，球虫亚纲(Coccidia)，艾美耳科(Eimeriidae)中的艾美耳属 (Eimeria)、等抱属(Isospora)、泰泽属(Tyzzeria),温扬属(Wenyonella)的球虫。每种动物都有各自特有 的球虫种，文献记录畜禽和野生动物的球虫种已达1340种。国内外对球虫病诊断的经典方法是病原检 查，并结合临床症状和病理剖检进行综合诊断。尽管国内外学者建立了多种免疫学和血清学技术，如色 素试验法、子袍子制动反应、间接血凝试验、免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验(EIASA)、免疫细胞 化学技术、随机引物扩增多态性DNA(RAPD)等，但由于这些方法检出的准确性和操作复杂等问题，尚 不能代替现有方法。最常用的方法仍是病原检查和综合诊断技术。 病原检查简单、易行，既可定量、又可定性，既可用于发病前、又可用于发病后，以确定动物或动物群 感染球虫的程度。综合诊断主要用于发病或死亡后的诊断，确定动物或动物群是否因感染球虫而发病或 死亡 病原检查可广泛用于流行病学调查、防治药物的筛选和临床验证、进出口检疫、无本病健康动物群 的建立等。 为了规范球虫与球虫病的检疫方法，使得检出结果客观、准确、一致，以保证 《中华人民共和国动物 防疫法》的实施，特制定本标准。 本标准的附录A、附录B为标准的附录，附录C为提示的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、中国农业科学院兰州兽医研究所。 本标准主要起草人:黄兵、陈兆国、白启。 中华人 民共和 国国家标准 Gs/T 18647-2002 动物球虫病诊断技术 Diagnostictechniquesforanimalcoccidiosis 1 适用范围 本标准规定了动物球虫病的病原检查和综合诊断技术。 本标准适用于禽类和兔的球虫病(感染)的诊断。 2 病原检查 2.1 材料准备 2门 1饱和盐水，配制方法见附录A(标准的附录)。 2.1.2 60目铜丝网或尼龙网、100mL量杯、50mL和100mL烧杯、5mL玻璃瓶、吸管、镊子、天平、离 心机、麦氏虫卵计数板、载玻片、盖玻片、显微镜等。 2-1.3被检动物或动物群的新鲜粪便不少于200g, 2.2 操作方法 2.2门 定性检查 2.2.1.1取被检动物或动物群的新鲜粪便10g，放人50mL烧杯中，加人适量水。 2.2.1.2 轻轻搅匀，经6。目铜丝网或尼龙网过滤。 2.2.1.3将滤液移人4支10mI,-15mL试管，2500r/min离心10min, 22.1.4 倾去上清液，各管沉淀物中加人少量饱和盐水，混匀。各管的沉淀物混悬液移人一个5MI玻 璃瓶。 2.2.1.5 用饱和盐水(见附录A功A满，盖上盖玻片(盖玻片须能与液面接触)，静置10min, 2}2.1.6 取下盖玻片，放在载玻片上。 2.2.1.7 置载玻片于显微镜台上，用10X10或10X40的倍数进行检查。 2.2.1.8 判定: a)发现球虫卵囊，判为阳性，说明该动物(群)已感染球虫，并可根据附录C(提示的附录)卵囊形态 特征，初步确定为哪一属的球虫; b)未发现球虫卵囊，需重复检查5次，仍未见球虫卵囊，本粪样可判为阴性。只有连续检查粪便 7d-10d，均未发现球虫卵囊，方可说明该动物(群)未感染球虫。 2.2.2 定量检查 22.2.1对定性检查中呈阳性的粪样，要进行定量检查。 2.2-2.2 取待检粪样2g，放人50mL烧杯。 2.2.2.3加人少量自来水搅匀，经60目铜丝网或尼龙网过滤，并用自来水冲洗几次滤网。 22.2.4 滤液经2500r/min离心1