基于TACI和BAFF结构的BAFF拮抗肽的研究-微生物与生化药学专业论文.docxVIP

中文摘要 B 细胞活化因子（BAFF），是 1999 年发现的肿瘤坏死因子配体超家族的成 员，BAFF 能够促进 B 细胞增殖、分化和成熟，并能维持 B 细胞的生理功能，在 体液免疫反应中发挥着非常重要的作用。正常生理条件下，BAFF 通过与三个已 知受体——TACI、BCMA 和 BR3 的特异性结合，可调节 B 细胞功能和维持机体 免疫平衡。而 BAFF 的缺乏会导致机体免疫功能低下，引起免疫缺陷病；BAFF 的过量表达则会诱发 B 细胞介导的自身免疫和 B 细胞恶性增殖，引起多种疾病 如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、干燥综合征（SS）和 B 淋巴细胞瘤。对于免疫缺陷病，可以采取补充 BAFF 的方法来进行治疗；而对于 自身免疫病和 B 淋巴细胞瘤，则需要以 BAFF 或 B 细胞为靶点来进行其功能的 抑制而实现治疗。目前，以 BAFF 为靶点来抑制 BAFF 功能的研究主要包括抗 BAFF 单克隆抗体、BAFF 的可溶性受体和抑制性短肽，其中，基于 BCMA 和 BR3 结构的拮抗肽已经被证明具有一定的抑制 BAFF 与相应受体结合的作用。本 课题是研究以 TACI 和 BAFF 的 3D 结构为基础而设计和合成得到拮抗肽，通过 体外实验，初步证明了以 TACI 型短肽作为治疗手段具有一定的可行性。具体研 究结果如下： （1）以 pET-30a-BAFF1 为基础，利用不同的内切酶和引物，构建得到一个 新的重组表达载体——pET-30a-BAFF2，在相同的诱导表达和纯化条件下，获得 可溶性的 BAFF1、BAFF2 蛋白。 （2）采用间接法 ELISA，以 BAFF 作为抗原， TACI-Fc 作为一抗，证明了 纯化得到的 BAFF1 和 BAFF2 都具有生物学活性，都能与 TACI-Fc 在体外发生 显著的特异性结合，而且 BAFF2 比 BAFF1 呈现出更强的结合活性，TACI-Fc 与 BAFF2 结合的饱和浓度约为 10 μg/mL。 （3）利用设计和合成得到的两种基于 TACI 关键氨基酸残基的拮抗肽—— TA 和 TC，来进行竞争性 ELISA，证明了 TA、TC 具有特异性抑制 BAFF2 与 TACI-Fc 结合的作用；与无关肽 NRP 维持 7%的抑制率相比，拮抗肽 TA 和 TC 的抑制率随着肽浓度的增大而显著增大，当浓度为 100 μg/mL 时，抑制率分别达 到 31%和 51%，这就为将来的细胞实验和动物实验奠定了基础。 关键词：BAFF，TACI，ELISA，拮抗肽 ABSTRACT B cell activating factor (BAFF) found in 1999 is a member of TNF ligand superfamily. BAFF can stimulate B cell prolifertation, differentiation, maturation and maintain the normal function of B cell, and thus plays an important role in the humoral immunity. In normal physiological status, BAFF can regulate B cell function and immune balance through specifically binding to its three receptors-TACI, BCMA and BR3. BAFF deficiency may lead to immunodeficiency. Overexpression of BAFF may induce B cell mediated autoimmunity and B cell maliganance and lead to various diseases such as ystemic lupus erythematosus (SLE), rheumatoid arthritis (RA), Sjogren’s syndrome (SS) and B cell lymphoma. Immunodeficiency is usually treated with soluble BAFF, while autoimmune diseases or B cell lymphoma is treated by targeting BAFF or B cell. At present, researches on inhibiting the function of BAFF by targeting BAFF mai