基于TLR4通路的黄连碱、芦荟大黄素抗炎作用机制研究-药理学专业论文.docxVIP

学 位 论 文 基于 TLR4 通路的黄连碱、芦荟大黄素抗炎作用 机制研究 The Research on Coptisine and Aloe-emodin Anti-inflammatory Mechanism based on TLR4 Signaling Pathway 胡泊洋 指导教师姓名： 孟宪丽（教授） 申请学位级别： 硕 士 专 业 名 称： 药理学 论文提交时间： 2014 年 5 月 论文答辩时间： 2014 年 5 月 二○一四年五月 目 录 中文摘要 I AbstractIII 英文缩略词表 V 前言 1 第一部分 黄连碱、芦荟大黄素对巨噬细胞炎症模型的影响 5 1.1 实验材料5 1.1.1 受试药物5 1.1.2 实验对象5 1.1.3 实验试剂及其配制5 1.1.4 实验仪器6 1.1.5 实验场所6 1.1.6 统计方法7 1.2 实验方法7 1.2.1 黄连碱、芦荟大黄素对巨噬细胞炎症模型释放炎症因子的影响7 1.2.2 黄连碱、芦荟大黄素对巨噬细胞炎症模型炎症因子基因表达的影响8 1.3 实验结果10 1.3.1 黄连碱、芦荟大黄素对巨噬细胞炎症模型释放 NO、IL-6 的影响 10 1.3.2 黄连碱、芦荟大黄素对巨噬细胞炎症模型细胞因子 mRNA 的影响 12 1.4 小结14 1.5 讨论15 第二部分 黄连碱、芦荟大黄素抗炎作用机制研究 19 2.1 实验材料19 2.1.1 受试药物19 2.1.2 实验对象19 2.1.3 实验试剂及其配制19 2.1.4 实验仪器20 2.1.5 实验场所20 2.1.6 统计方法20 2.2 实验方法21 2.2.1 细胞接种与培养21 2.2.2 实验分组与处理21 2.2.3 指标测定21 2.3 实验结果25 2.3.1 黄连碱、芦荟大黄素对 NF-κB 信号通路关键蛋白 IκBα 的影响 25 2.3.2 黄连碱、芦荟大黄素对 MAPK 信号通路关键蛋白的影响 26 2.3.3 黄连碱、芦荟大黄素对 PI3K/Akt 信号通路关键蛋白 Akt 的影响 29 2.4 小结30 2.5 讨论30 2.5.1 黄连碱、芦荟大黄素对 NF-κB 信号通路中 IκBα 蛋白的影响 31 2.5.2 黄连碱、芦荟大黄素对 MAPK 信号通路蛋白的影响 32 2.5.3 黄连碱、芦荟大黄素对 PI3K/Akt 信号通路中 Akt 蛋白的影响 33 结论 35 问题与展望 36 文献综述 44 致谢 55 在校期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 56 声明及授权书 57 基于 TLR4 通路的黄连碱、芦荟大黄素抗炎作 用机制研究 中文摘要 目的：本研究以黄连碱、芦荟大黄素为研究对象，以内毒素（LPS）诱导的小鼠 RAW264.7 巨噬细胞为实验模型，通过考察两药对炎症因子及 TLR4 介导的炎症通路下 游蛋白表达的影响，探讨芦荟大黄素、黄连碱的体外抗炎活性及作用机制。 方法： （1）以LPS为诱导剂，刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞，建立炎症细胞模型； （2）Griss法检测细胞培养上清液中一氧化氮（NO）的含量； （3）ELISA法检测细胞培养上清液中白介素-6（IL-6）的含量； （4）qRT-PCR技术检测细胞中诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、白介素-1β（IL-1β）、 IL-6的基因表达； （5）Western Blot技术检测细胞中IκBα、ERK1/2、JNK、p38和Akt蛋白的表达。 结果： （1）芦荟大黄素 5μM、10μM、20μM 剂量组和黄连碱 1μM、10μM、30μM 剂量组 对 RAW264.7 巨噬细胞 NO 和 IL-6 的释放量具有显著抑制作用（p0.001），抑制作用 随剂量增加而增强。 （2）黄连碱1μM、10μM、30μM剂量组对iNOS、IL-1β、IL-6 的基因表达均有显著 抑制作用（p0.001），对IL-1β、IL-6的基因表达呈浓度依赖关系。芦荟大黄素5μM、 10μM、20μM剂量组对iNOS及IL-6 的基因表达具有显著抑制作用（p0.001），并且具 有浓度依赖性。芦荟大黄素在10μM、20μM时对IL-1β的基因表达表现出显著抑制作用 （p0.01）。 【课题来源】国家自然科学基金：基于胆碱能抗炎通路的三黄泻心汤―泻火解毒‖抑制内毒素血症机 制的研究，NO基于交汇调控炎症信号转导通路的大黄-黄芩“相使为用”配伍机制研 究，NOI （3）芦荟大黄素和黄连碱各剂量组均抑制IκBα蛋白降解。黄连碱1μM组IκBα表达量 与空白组相当，与模型组无差异