eRF3b和DRC3抑制TGFβ1诱导的肝纤维化及其机制的体外研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学 位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医 科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要 内容相关的论文，第_署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、 申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。 ．。芦盈j=蹬x^o 际铬； 碱雌各螂师签唧式级琴嚣善嚣 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中 特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究 成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名： 导师签章 ≯l罗 年P月沙日 万方数据 目 录 中文摘要 l 英文摘要 9 英文缩写 20 研究论文eI心3b和DRC3f抑制TGF．131诱导的肝纤维化及其机制的 体外研究 引言 22 第一部分eRF3b和DRC3f抑制TGF．131诱导的肝星状细胞纤维化 因子的表达 前言日U舌 2525 材料与方法 25 结果 37 附图 48 附表 61 讨论 68 小结 70 参考文献 70 第二部分eRF3b和DRC3f对TGF．131诱导的肝星状细胞增殖和周 期的影响 前言刖舌 ．7～4． 材料与方法 74 结果 80 附图 88 附表 95 讨{仑 100 小结 102 参考文献 103 第三部分eRF3b和DRC3f对TGF．131诱导的肝星状细胞凋亡和迁 移的影响 前言fIU舌 104 万方数据 材料与方法 104 结果 107 附图 116 附表 125 讨论 131 小结 133 参考文献 133 结论 136 综述一TGF．131与细胞凋亡信号通路 ．137 综述二补体C3及其生物学上的多态性 ．153 致谢 164 个人简历 165 万方数据 中文摘要 eRF3b和DRC3f抑制TGF—p1诱导的肝纤维化及其 机制的体外研究 摘 要 本实验室的前期研究中，应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱 (matrix-assisted laser desorption／ionization time-of flight mass spectrometry MALDI TOF MS)技术检测到在肝硬化、肝细胞肝癌、慢性 肝炎患者血清中表达量不同的两个小分子多肽：真核肽链释放因子3b (eukaryotic peptide chain releasing factor 3b，eRF3b)和脱精氨酸补体C3f (C3f-desAr，DRC3f)。认为两个多肽可能参与了慢性肝炎及其病情进 展的某种机制。后研究又发现，eRF3b和DRC3f多肽片段分别预防性给 药可抑制刀豆蛋白诱导的肝细胞的凋亡，减轻肝损伤。 鉴于本实验室前期研究的成果，为了阐明eRF3b和DRC3f在慢性肝 病发生和发展中的作用，本课题选择二者对肝纤维化的影响作为切入点， 通过体外细胞培养，采用多肽片段合成和RNA干扰技术，在细胞和分子 水平，研究二者对肝纤维化的影响，并进一步探讨相关的分子和信号机制。 本课题包括以下三部分研究。 第一部分eRF3b和DRC3f抑制TGF-IjI诱导的肝星状细胞纤维化因子的 表达 目的： 探讨eRF3b和DRC3f对TGF．B1诱导的HSC纤维化相关因 子的表达的抑制作用 方法：①选用体外培养的人肝星状细胞LX．2细胞株作为实验对象， 分别用不同浓度TGF．131、eRF3b和DRC3f束U激HSC，MTT法筛选TGF．131 适宜作用剂量和多肽最佳作用剂量。②将eRF3b和DRC3f氨基酸多肽， 基因上调质粒表达载体pEGFP．C2．GSPT2、pEGFP．C2．GSPT-1 l 1，基因沉 默质粒表达载体pGPU6．GSPT2 shRNA干预TGF．B 1刺激的HSC，RT-real timePCR测定相关基因mRNA表达；Westemblot测定相关基因蛋白表达。 结果： 1 分别于24、48h，TGF．131各浓度组的HSC增殖活力均高于对照 组(P0．01)。于10ng／ml浓度达到增殖作用平台期。 万方数据 中文摘要 2外源性eRF3b氨基酸多肽对TGF．B1诱导的HSC各因子表达的影 响。 (1)eRF3b于O．1．100ng／ml浓度范围内，作用浓度与HSC抑制率呈 现正相关，4个时间点Pearson相关系数分别为：0．926、0．992、0．946、 0．968(P=-0．024，0．001，0．015，O．007)．均于100ng／ml达到抑制平台期。 (2)GSPT2：3个实验组的mR