慢病毒介导的稳定表达GSTM5的人支气管上皮细胞株的建立及其核转位分析.doc

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慢病毒介导的稳定表达GSTM5的人支气管上皮细胞株的建立及其核转位分析 【摘要】 目的 构建稳定表达GSTM5的人支气管上皮16hbe细胞株,探讨谷胱甘肽S转移酶mu5(GSTM5)核转位的关键因素。方法 构建表达GSTM5 基因的重组慢病毒载体并制备出相应的慢病毒,感染人支气管上皮16hbe细胞后,经嘌呤霉素筛选获得细胞克隆;实时荧光定量 PCR 和蛋白印迹法(Western-Blot)分别检测细胞株中GSTM5的 m RNA、蛋白表达水平;以TNF-α(10 ng/mL)刺激稳转株1小时,共聚焦荧光显微镜检测GSTM5核转位。结果:成功构建了重组慢病毒表达质粒PLVX-puro-GST

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