中医药干预脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化机制研究.pptVIP

中医药干预载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化机制研究 张文高（山东中医药大学） 刘美霞（中国中医科学院西苑医院） 刘龙涛（中国中医科学院西苑医院） 姜浩（北京中医药大学） 朱莹（广东省中医院） 吴敏（中国中医科学院广安门医院） 2011年11月19日 河南 郑州 泡沫细胞的生物学特征 泡沫细胞是As斑块内特征性病理细胞 是As的早期标志 在形态学上，细胞浆内脂质成分明显增多，并聚集成滴，镜下可见胞浆呈泡沫样改变； 细胞内总胆固醇增加，且胆固醇酯占总胆固醇的一半以上。 炎症介质与泡沫细胞形成 内源性炎症介质氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及外源性炎症介质脂多糖（LPS）均能促进、诱导泡沫细胞的形成。 抑制泡沫细胞形成是阻止As发生发展的重要途径 大量泡沫细胞堆积形成脂质条纹乃至脂质斑块； 斑块的进一步破裂、出血及血栓形成会导致各种心脑血管事件的发生。 泡沫细胞形成是As发生发展的关键环节。 抑制泡沫细胞形成是阻止As发生及进一步发展的重要途经。 对泡沫细胞的早期积极干预是防治As及相关心脑血管疾病的重要途径。 前期研究的回顾 脂欣康干预SD大鼠血管平滑肌细胞泡沫化的研究 脂欣康胶囊 平滑肌细胞的培养与鉴定 ox-LDL诱导细胞泡沫化及鉴定 分组及制备含药血清 研究分组 A 脂欣康组 B 血脂康组 C 洛伐他汀 D 罗格列酮组 E 生理盐水组 F 空白对照组——不加含药血清 对泡沫细胞内总胆固醇含量的影响 对泡沫细胞内胆固醇酯含量的影响 对总胆固醇与胆固醇酯比值的影响 激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+浓度 对细胞内Ca2+浓度的影响 对VSMC源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响 对VSMC源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响 小 结 脂欣康具有与洛伐他汀等相似的显著降低总胆固醇及胆固醇酯含量的作用，并且胆固醇酯与总胆固醇的比值均降至50%以下； 脂欣康具有与洛伐他汀相似的抑制平滑肌源性泡沫细胞内CD36 mRNA表达的作用，并且优于洛伐他汀； 脂欣康可显著降低平滑肌源性泡沫细胞内的Ca2+浓度，优于洛伐他汀及血脂康。 小 结 脂欣康与血脂康均显著抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化，从而抗As斑块形成，并有助于稳定斑块。 其作用机制： 调脂、改善脂质代谢 降低细胞内钙负荷 抑制细胞内CD36 mRNA的表达 ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞模型 ApoE在体内胆固醇转运过程中作为脂蛋白配体发挥作用， 当ApoE缺乏时，由其诱导的胆固醇外流受阻， ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞转化为泡沫细胞过程中，胆固醇酯蓄积更加明显，更容易形成As病变，是作为体外培养巨噬细胞源性泡沫细胞模型进行干预研究的较理想选择。 一、脉心康干预ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化及其机制研究 方药组成： 人参 银杏叶 降脂红曲 绿茶 功效成分组方 研究分组 脉心康组 洛伐他汀组 罗格列酮组 生理盐水组 空白对照组——不加含药血清 （激光共聚焦显微镜） 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPARγ蛋白表达的调控作用 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白表达的调控作用 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞CD36蛋白表达的调控作用 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPARγmRNA表达的调控作用 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA表达的调控作用 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞CD36mRNA表达的调控作用 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞培养液TNF-α的影响 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞培养液IL-1β的影响 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内总胆固醇的影响 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇酯的影响 脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇酯/总胆固醇比值的影响 结 论 以ox-LDL诱导24小时、48小时、72小时后，镜下观察可见巨噬细胞泡沫化程度随时间逐渐加重 脉心康含药血清干预后，细胞内胆固醇酯、总胆固醇含量及其比值均显著降低 细胞内钙离子水平显著降低 PPARγ、ABCA1蛋白及mRNA表达均显著增加 CD36蛋白及mRNA表达显著减少 细胞培养液中TNF-?、IL-1β含量显著降低 结 论 脉心康干预巨噬细胞泡沫化的机制，与以下几方面有关： 抑制胆固醇积聚 拮抗细胞内钙超载 激活PPARγ信号通路 抑制炎症反应 巨噬细胞泡沫化 以ox-LDL与LPS联合诱导ApoE基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化 联合诱导24小时及48小时 显微镜下观察可见巨噬细胞均