低硒对F344大鼠子代神经行为发育和海马神经前体细胞分化、成熟蛋白表达的影响-神经病理专业论文.docxVIP

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 3 的饲料配方，以 F344 纯系大鼠为实验对象建立低硒动物模型。实验分为两组，分别喂以 不同硒碘水平的人工配制饲料：（1）合成饲料对照组(Control)，硒含量 0.1～0.3μg/g， 碘含量≥0.2μg/g；（2）低硒组(Se-)，硒含量 0.02μg/g，碘含量≥0.2μg/g。 2. GPx 活性测定 改良 DTNB 法检测母代和子一代 P4、P7、P14 和 P21 大鼠全血中 GPx 活性； 3.检测子一代大鼠出生后生长体重变化、生理发育指标、早期神经行为学改变和开场行为 表现。 4.Morris 水迷宫空间学习记忆实验 观察子一代大鼠寻找站台的潜伏期、有哪些信誉好的足球投注网站策略，穿越 原站台次数、在原站台象限停留时间等。 5.Nissl (甲苯胺蓝)染色 观察子一代大鼠 P4、P7、P14 和 P21 海马形态学变化。 6.免疫组化技术 观察生后仔鼠不同时间点（P4、P7、P14 和 P21）海马内神经前体细胞 标记蛋白 nestin、增殖细胞核抗原 PCNA、神经胶质细胞分化成熟相关蛋白 GFAP、CNPase 的表达情况。 结果 1. GPx 活性：（1）母代 Se-组大鼠全血 GPx 活性显著低于对照组（P0.05）； （2）子一代 Se-组同日龄大鼠 GPx 活性也显著低于相应对照组（P0.05）。 2. 早期生长发育指标的检测：Se-组仔鼠出生后早期体重增长较对照组缓慢(P0.05)，但 耳廓分离、出毛、门齿萌出、睁眼及毛发发育等几个指标与对照组比较无显著差异。 3. 早期神经行为发育指标检测中：生后 4 天时，Se-组仔鼠的平面翻正评分明显较对照组 低（P0.05）、悬崖回避实验阳性率也显著低于对照组；7 天时，两组间无显著性差异。 P10 时，Se-组仔鼠的听觉惊愕阳性达标率低于对照组（P0.05）；在 P12 和 P14 时的 前臂握力和行走能力实验中，Se-组与对照组表现无显著性差异（P﹥0.05）。开场实验 中，Se-组雄鼠在中央格停留时间、穿行格数（活动能力）较对照组明显减少，（P﹤0.05）； Se－组雌鼠在开场实验各个指标与对照组无显著性差异。 4. Morris 水迷宫空间学习记忆实验：（1）潜伏期：定向航行实验第 4、5 天时，Se-组潜 伏期明显长于对照组（P0.01）；两组雌雄性别之间无显著性差异；（2）运动策略结果： 定向航行实验第 5～9 时段采用直线式和趋向式为主要的寻找策略，Se-组在第 6 和第 9 时段的训练中所采取的直线式策略次数明显比对照组少（P =0.009; P =0.03）。（3） 空间探索实验中，Se-组在原站台所在象限停留时间比对照组短（P0.05）。 5. 海马形态学观察：从 P4～P21，海马各分区锥体细胞层逐渐变薄，而齿状回（DG）颗粒 细胞层细胞则呈逐渐增多的趋势。相同日龄内，与对照组相比，Se－组海马皮层锥体 细胞层较厚，齿状回 (dentate gyrus, DG)内臂形成较晚。 6. 海马神经前体细胞标记蛋白巢蛋白（nestin）和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化结 果：总体上，从 P4～P21 这个发育过程中，大鼠海马中都有 nestin 和 PCNA 抗原的表 达，且两个指标阳性总体表达趋势比较相似，都随日龄增加逐渐降低。阳性细胞计数 和积分光密度值测量结果：（1）P4 时 Se－组海马 DG 区的 nestin 表达较对照组多 (P0.05)，其余时间点在相同海马分区，两组间阳性表达无显著差异。（2）PCNA 阳性 细胞计数结果：与对照组相比，Se－组 P4～P7 海马 CA1 和 CA3 区阳性细胞数多；P21 时 CA1 和 DG 区阳性细胞也较对照组多((P0.05)。 7.海马胶质细胞分化成熟相关蛋白免疫组化结果：（1）GFAP：P4 海马未见阳性细胞表达， P7 时低硒组海马 DG 区，P21 时的 DG 区 GFAP 免疫组化积分光密度值较对照组小 （P0.05），在选取的其余发育时间点无显著差异（P0.05）。（2）CNPase：从 P4～P7， 海马均未见 CNPase 阳性表达；至 P14 时，仅能在海马伞、海马槽和分子细胞层见到少 量呈丝状的弱阳性表达， P21 海马低硒组和对照组海马各区 CNPase 的阳性表达无显著 性差异（P0.05）。 结论 1.成功复制 F344 近交系大鼠低硒动物模型并繁殖到子一代 2.低硒可导致子一代大鼠在早期生长，神经生理反射及神经行为方面出现不同程度的发育 延迟，影响雄鼠开场实验中对新异环境的适应能力。 3.低硒可导致子一代大鼠在 Morris 水迷宫的空间记忆能力减弱。 4.低硒能不同程度地延迟大鼠海马形态发