低剂量雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin及podocin表达的影响-内科学(肾脏病)专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 3 低剂量雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞 nephrin 及 podocin 表达的影响 【摘要】 目的 本实验观察低剂量雷帕霉素（rapamycin，简称RAPA）对 糖尿病肾病大鼠血糖、内生肌酐清除率、肾重体重比、肾脏病理，以及nephrin 和podocin两种足细胞特异的蛋白分子表达的影响，探讨糖尿病肾病蛋白尿的发 病机制，观察低剂量雷帕霉素能否通过减轻足细胞的损伤而延缓糖尿病大鼠的肾 脏损害。方法 选取24只SD雄性大鼠，体重200-250g，随机分为正常对照组（C 组，n=8）,糖尿病组（n=16）。糖尿病组大鼠禁食12小时后按75mg/kg体重给予1 ％链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔内注射，正常组大鼠给予等体积柠檬酸- 柠檬 酸钠缓冲液腹腔内注射。注射后72小时尾静脉取血测血糖，以血糖≥16. 7mmol / L 为造模成功。造模后第7、14、28天再次测血糖，仍符合上述标准者为稳定成模 的大鼠，进入后续实验，不符合者退出实验。将稳定成模的糖尿病组大鼠按体重 随机分为两组：糖尿病肾病未治疗组（DN未治疗组，n=8），糖尿病雷帕霉素干 预组（DN+RAPA组，n=8）。从造模后第五周起DN+RAPA组大鼠每日按1mg/Kg 体重给予0. 3%雷帕霉素溶液灌胃给药，C组和DN未治疗组以相同体积0. 5%羧甲 基纤维素溶液灌胃，共干预8周。实验结束时检测各组大鼠血糖、24小时尿蛋白、 体重校正的内生肌酐清除率、肾重体重比的变化；HE及PASM染色观察各组大鼠 肾脏的病理改变，透射电镜观察肾小球的超微结构改变；通过免疫组化二步法观 察nephrin及podocin在肾组织的定位和表达，并应用图像软件分析系统对二者的 表达进行半定量测定；通过RT-PCR方法半定量分析nephrin和podocin mRNA的表 达情况。结果 与正常对照组相比，DN未治疗组大鼠血糖明显增高，体重校正 的内生肌酐清除率、24小时尿蛋白量及肾重体重比均显著增加（P0.01），肾脏 体积明显增大，透射电镜下可见肾小球足细胞足突增宽、部分融合，基底膜节段 性增厚，通过半定量分析提示足细胞nephrin和podocin的蛋白及 mRNA表达均明 显下调（P0.01）；DN+RAPA组体重校正的内生肌酐清除率及24小时尿蛋白量较 DN未治疗组明显降低（P0.01），HE和PASM染色显示肾小球肥大、系膜基质增 生程度较DN未治疗组明显减轻，电镜下观察足突增宽、融合现象及基底膜增厚 程度均较DN未治疗组减轻，免疫组化及RT-PCR半定量分析提示nephrin及podocin 的表达较DN未治疗组增加，差异有统计学意义（P0.01）。结论 nephrin、podocin 是构成裂孔隔膜（SD）两种重要的蛋白分子，对于维持SD结构及功能完整发挥 重要作用，二者表达减少，可引起滤过膜完整性破坏，导致蛋白尿。糖尿病肾病 nephrin、podocin表达减少，可能是发生蛋白尿的机制之一。低剂量雷帕霉素治 疗大鼠糖尿病肾病可通过增加nephrin及podocin的表达及减少系膜基质沉积、通 过维持肾小球滤过屏障及足细胞结构的完整性，使蛋白尿排出减少，从而延缓糖 尿病肾病的进展。 【关键词】糖尿病肾病 雷帕霉素 足细胞 nephrin podocin Low-dose rapamycin alters the expression of nephrin and podocin in rats with diabetic nephropathy 【Abstract】Objective This experiment evaluated the effect of low dose rapamycin on rats with diabetic nephropathy, including blood glucose, weight-adjusted endogenous creatinine clearance rate (Ccr), kidney to body weight ratio, renal pathology and the expression of two podocyte-specific protein nephrin and podocin. Based on the experiment results, we tried to illustrate our hypothesis that low dose Rapamycin could delay the progress of kidney disease in diabetic rats by relieving damage to podocyt