狗肝菜多糖对肝损伤的保护作用及机制研究-病理与病理生理学专业论文.docxVIP

I I 狗肝菜多糖对肝损伤的保护作用及机制研究 中 文 摘 要 肝损伤是各型肝病共同的病理基础，其长期存在往往是导致肝纤维化， 甚至肝硬化、肝癌发生的重要始动因素。因此防治肝损伤是临床肝病治疗 的主要环节之一。肝损伤机制复杂，目前公认与脂质过氧化、免疫功能紊 乱、肝细胞异常凋亡有关。 狗肝菜[Dicliptera chinensis (L.) Nees.]为民间药食两用的中草药， 主要含有多糖、有机酸、氨基酸等物质，民间常用于治疗肝脏疾病。有报 道其有效成分多糖对动物模型中 CCL4 导致化学性肝损伤和卡介苗(BCG)+脂 多糖(LPS)所致的免疫性肝损伤具有降低相关血清酶的作用，但未对其保肝 作用进行全面评价及作用机制探讨。本研究旨在通过急性重症肝炎模型、 免疫肝损伤模型和免疫抑制模型全面系统的评价狗肝菜多糖保肝作用及其 免疫调节作用，进一步阐明狗肝菜多糖抗肝损伤的作用机制，为狗肝菜多 糖在保肝治疗方面的应用提供实验依据。 目的 1. 研究狗肝菜多糖对 D-氨基半乳糖（D-GalN）及脂多糖（LPS）所 致大鼠急性重症肝炎的影响及其机制。 2. 研究狗肝菜多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用及其机制。 3. 研究狗肝菜多糖对环磷酰胺导致的免疫功能低下小鼠的免疫功能 的影响。 方法 1.采用 D-GalN+LPS 造模， 将 wistar 大鼠随机分成模型、狗肝菜多 糖高、低剂量和正常对照 4 个组；于 6h、12h 分别观察并计算各组动物死 亡率；存活动物于 6h 采血检测 ALT、AST、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介 素 1β(IL-1β)；12h 采血检测血清 ALT、AST、TNF-α、IL-1β和一氧化氮 II II (NO)； 12h 后全部处死存活动物，HE 染色观察肝脏病理形态学变化，免疫 组化检测肝组织中凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 的表达。 2.采用 BCG+LPS 造模，将昆明种小鼠随机分为正常对照、模型组，狗 肝菜多糖高、中、低剂量处理组，联苯双酯处理阳性对照组。观察狗肝菜 多糖对小鼠血清 ALT, AST 活性，肝组织 SOD 和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX) 活性和 MDA 含量;HE 染色观察肝组织病理学改变。 3. sc 环磷酰胺导致免疫低下小鼠模型，将昆明种小鼠随机分为正常对 照、模型组，狗肝菜多糖高、中、低剂量处理组，左旋咪唑处理阳性对照 组。测定小鼠胸腺、脾脏重量并计算脏器系数，碳粒廓清法测定单核巨噬 细胞吞噬功能，比色法测定血清溶血素含量。MTT 法测定正常小鼠脾脏淋巴 细胞增殖情况。 结果 1. 6h 各组动物均存活；与模型组相比，狗肝菜多糖处理组 12h 死亡 率明显低于模型组。模型组血清 ALT、AST 活力和 TNF-α、IL-1β、NO 水 平均升高，狗肝菜多糖高、低剂量组血清指标均明显低于模型组。模型肝 组织大片坏死、淤血，狗肝菜多糖高、低剂量组组织损伤程度明显降低， 以高剂量组效果最佳。狗肝菜多糖高、低剂量组与模型组比较，Bax 在肝组 织中的表达明显降低，Bcl-2 的表达改变不明显。 2. 与模型组比较，狗肝菜多糖能降低血清 AST, ALT 活性，降低肝组 织 MDA 含量,增加肝组织 SOD, GSH-PX 活性，能够减轻肝细胞损伤程度。 3. 狗肝菜多糖能对抗环磷酰胺引起的小鼠脾萎缩和胸腺萎缩，提高免 疫抑制小鼠对碳粒的吞噬作用，而对小鼠血清溶血素的生成有较强的促进 作用，能促进小鼠脾脏淋巴细胞的增殖。 结论 1. 狗肝菜多糖能减轻 D-GalN/ LPS 诱导的肝损伤，可能通过降低炎 性介质 TNF-α、IL-1β和 NO 的水平发挥作用，同时抑制肝损伤时的异常凋 亡。 2. 狗肝菜多糖对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用，其机制可能与其抗 PAGE PAGE VI 氧自由基、抑制脂质过氧化作用有关。 3. 狗肝菜多糖能增强免疫抑制小鼠的免疫功能。 关键词 狗肝菜多糖；保肝；免疫抑制；凋亡；免疫调节 LIVER INJURY PROTECTIVE EFFECTION OF POLYSACCHRIDES OF DICLIPTERA CHINENSIS AND THE UNDERLINING MECHANISM ABST RACT Hepatic injury is the commom histopathological basis of diverse hepatic diseases. It’s continuous existing could trigger the process of hepatic fibrosis, cirrhosis and heptocarcinogenesis. So, controling hepatic inju