供体骨髓间充质干细胞抑制肝移植大鼠免疫排斥研究-外科学专业论文.docxVIP

— — PAGE 1— 摘 要 供体骨髓间充质干细胞抑制肝移植大鼠 免疫排斥研究 研究生：孙振强 导师：温浩 教授 摘 要 目的：建立大鼠肝移植急性排斥反应模型，探讨供体骨髓间充质干细胞（MSCs） 抑制肝移植大鼠免疫排斥的作用。方法：利用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移 植模型，分离培养供体 MSCs，并观察细胞形态学变化；实验随机分为空白对照组(A 组)、FK506 组(B 组)和 MSCs 组(C 组)。行大鼠原位肝移植同时，A 组同期输注生理 盐水，B 组术后隔天一次给予 FK506（0.25mg/kg)灌胃 2 周，C 组同期输注与 A 组同 剂量的供体 MSCs 给受体。观察手术操作时间及手术成功率及术后第 10 天肝功能的 变化、病理改变、免疫组化 TGF-β1 与 IL-10 的表达、Y 染色体定位及受体生存期。 结果：大鼠原位肝移植模型制作，供体手术时间为(23±3)min ,受体手术时间为(45± 5) min ,无肝期为(17±2) min，手术成功率为 95.2%。MSCs 细胞培养显示，原代培养 细胞呈现杂质相对较多，融合性差，第 3 代培养细胞杂质少，增值速度快，融合性 强。术后第 10 天肝功能，C 组受体大鼠的 ALT 和 AST 分别为 103.16±31.03U/L 及 149.67±37.80U/L，较 A 组 756.33±103.91U/L 及 635.00 ±134.43U/L 显著降低﹝P ＜0.01﹞，且 C 组低于 B 组；病理变化，A 组为重度排斥，B、C 两组排斥反应较 A 组显著减轻，且 C 组较 B 组病理反应级别更低；免疫组化检测 TGF-β1 及 IL-10，B、 C 两组显示强阳性表达且 C 组比 B 组更明显，而 A 组则为弱阳性表达；SRY 原位分 子杂交检测显示 C 组出现含 Y 染色体的雄性阳性细胞（即 MSCs），以汇管区聚集为 多；C 组中位生存时间（MST）超过 63 天，较 A 组 11 天显著性延长，且 C 组明显 长于 B 组。结论：（1）利用改良的 Kamada 二袖套法，成功建立稳定的大鼠原位肝 移植模型（2）第 3 代 MSCs 更适合于细胞移植。（3）肝移植同时输注供体骨髓间充 质干细胞能够抑制受体对移植肝的免疫排斥，诱导大鼠肝移植术后长期存活。 关键词: 骨髓间充质干细胞；原位肝移植；免疫排斥；Y染色体；大鼠 新疆医科大学医学硕士学位论文 Study on immunodepression in rats with liver transplantation by mesenchymal stem cells from donors Postgraduate: Sun Zhenqiang Supervisor: Prof. Wen Hao Abstrct Objective： By making the model of OLT, to investigate immunodepression effects in rats with liver transplantation by mesenchymal stem cells from donors. Methods：In the current study, according to the classic technique of two-cuff，we made the models of rat OLT. We isolated and cultured mesenchymal stem cells from bone marrow of doners and observed the cell morphological changes. All the experimented rats were randomly divided into three groups: The third group (Group C) received orthotopic liver transplantation(OLT) and simultaneous injection of mesenchymal stem cells; The control group (Group A) received the same dose of physiological saline as Group C; The second group (Group B) received FK506(0.25 mg/kg) once per two days for two weeks after OLT. We observed the operative time and operativ