分泌抗磺胺类药物单克隆抗体杂交瘤株的建立-食品科学专业论文.docxVIP

哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 摘 要 磺胺类药物（SAs）是畜牧业生产上广泛应用的一类化学合成抗菌药，其具有性 质稳定，易于保存以及副作用低等优点。然而过量该类药物使用会引起人的过敏性反 应，且有可能致癌。磺胺类药物在动物性食品中残留引起的生态环境污染和人类健康 危害已倍受关注，因此许多国家对磺胺类药物最高残留量（MRL）均做了明确的规定。 目前用于磺胺类药物残留的检测方法很多，如气相色谱法（GC）和质谱法（MS）、 高效液相色谱法（HPLC）等多种理化方法。虽然这些方法灵敏，准确，但是样品前处 理步骤繁琐，花费时间长，费用高，限制了它的广泛使用。因此研究开发一种快速简 便的磺胺类药物残留检测技术已迫在眉睫。酶联免疫吸附检测法（ELISA）以及胶体 金免疫层析技术（GICA）具有快速、简便、特异性好和灵敏度较高等优点，是药物残 留检测的一种有效方法。 本研究的目的是建立分泌抗磺胺类药物单克隆抗体杂交瘤株，为建立磺胺类药物 免疫学检测方法基础材料。 本研究采用化学方法合成 3 种具有磺胺类药物母核结构的半抗原，并通过核磁共 振仪以及液-质联用来鉴定为预期产物。用重氮化法将 3 种合成半抗原以及 5 种磺胺类 药物（磺胺胍、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑）与牛血清白蛋 白和卵清白蛋白偶联，用紫外光谱、红外光谱鉴定偶联成功。 用偶联的完全抗原免疫 BALB/c 雌性小鼠 6~7 次，用双向琼脂扩散法以及间接 ELISA 方法检测血清效价，当间接 ELISA 效价达到 1:6400 以上时，取高效价的小鼠 脾细胞与 SP2/0 骨髓瘤细胞进行细胞融合，用 HAT 培养基筛选培养，在融合后第 4~5 天出现小的克隆，第 10 天杂交瘤细胞铺满孔底的 60%，用建立的间接 ELISA 法筛选 阳性孔，筛选得到阳性杂交瘤细胞。 本研究成功合成 3 种半抗原，并利用重氮偶联法成功制备免疫原和包被原。利用 细胞融合技术，成功制备了分泌抗磺胺类药物单克隆抗体杂交瘤株，为建立磺胺类药 物免疫学检测方法奠定了坚实基础。 关键词： 磺胺类药物；半抗原；重氮化；细胞融合；杂交瘤细胞 I II II I I 哈尔滨工业大学工学硕士学位论文 Abstract Sulfonamides(SAs) are synthetic bacteriostatic drug, which were widely used in stock raising industry for their characteristics of stability, easy to preserve and low adverse reaction. However, their overuse may cause anaphylactic reaction and increase their carcinogenicity. Therefore, more and more attention is paid to their harm to human healthy and potential pollution to environment due to their residues in animal food. So many countries have established the Maximum Residues Limits(MRL). There are many methods for sulfonamides detecting, such as GC、MS、HPLC and so on. Though some of these methods are sensitive and accurate. However,the pretreatment of samples is complicated, time-consuming and its cost is quite high. All the reasons above restrict the extensive use of those methods. So we need a rapid and convenient method for sulfonamides detecting. Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and gold immunochromatographic assay(GICA) are rapid, special and sensitive biological methods, and they are more effective to detect sulfonamides residue