弓形虫感染诱导小胶质细胞的活化以及米诺环素的抑制作用-医学免疫学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 3 中英文缩略词表 英文缩略词 英文全称 中文名称 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 IL-1β Interleukin-1β 白细胞介素-1β IL-6 Interleukin-6 白细胞介素-6 TNF-ɑ Tumor necrosis factor-ɑ 肿瘤坏死因子-ɑ NF-κB Nuclear factor-κB 核因子-κB ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay  酶联免疫吸附实验 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 DEPC Diethyl pyrocarbonate 二乙基焦碳酸盐 FCM FITC Flow cytometry fluorescein isothiocyanate 流式细胞技术 异硫氰酸荧光素 PI Propidium iodide 碘化吡啶 PV Parasitophorous vacuole 纳虫空泡 TLR Toll-like receptor Toll 样受体 INF-γ Interferon-γ 干扰素-γ DCs Dendritic cells 树突状细胞 MHC Major histocompatibility complex 主要组织相容性复合 体 MAPK Mitogen-activated protein 有 丝 分 裂 原 活 化 蛋 白 kinase 激酶 SDS- PAGE Sodiun dodecyl sulphate polyacrylamind gel electrophoresis 十 二 烷 基 磺 酸 钠 － 丙 烯酰胺凝胶电泳 TM Tunicamycin 衣霉素 TEMED N,N,N’N’-tetramethylenedia mine TBST Tris buffered salin +tween-20 四甲基乙二胺 Tris 缓冲盐水+吐温 弓形虫感染诱导小胶质细胞的活化以及米诺环素的抑 制作用 摘 要 背景及目的 弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，能感染包括人在内的几乎所有的 恒温动物。无论是先天性还是获得性感染，都对人类的健康产生严重的威胁。先 天性弓形虫病主要表现为脑积水、脑钙化、出生后智力发育迟缓、癫痫等；获得 性弓形虫病可表现为头痛、发热、淋巴结肿大，免疫力低下患者可并发全身严重 弓形虫病，例如弓形虫脑炎等。在机体免疫缺陷或功能低下时，脑部的包囊破裂， 缓殖子向速殖子转化，弓形虫隐性感染状态被活化，导致致命性弓形虫脑炎的发 生。弓形虫不同的基因型与疾病的发生、发展以及结局有关。在北美和欧洲，主 要的弓形虫基因型为Type I、Type II 和Type III, 而我国的优势基因型为Chinese 1 型。小胶质细胞，是中枢神经系统中主要的固有免疫成分，包括静息和活化两种 状态，在脑部病理损伤时发挥着重要的作用。在感染、损伤等刺激时，小胶质细 胞能活化，分化、增殖并分泌大量的神经毒性因子，发挥免疫保护功能，但是小 胶质细胞过度的活化也会对神经元等周围组织产生损伤。在弓形虫感染中，对于 小胶质细胞的影响尚不十分清楚。本文主要研究小胶质细胞（BV-2）细胞系在弓 形虫TgCtwh6虫株（Chinese 1基因型，成囊株）感染中的变化，并加入了小胶质细 胞的抑制剂米诺环素(minocycline)，以了解其对小胶质细胞的抑制作用，进而为 弓形虫脑病的防治提供实验基础。 方法 在transwell共培养体系中用弓形虫TgCtwh6虫株感染BV-2细胞，同时用米诺 环素进行干预，分为普通培养基对照组、弓形虫TgCtwh6虫株感染的代谢物作用组 和米诺环素抑制剂组。在倒置显微镜下观察细胞的形态；用流式细胞术检测细胞 凋亡情况；ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量；用Griess法检测细 胞上清中NO的含量；RT-PCR法检测BV-2细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS mRNA 的表达；Western blotting检测BV-2细胞iNOS蛋白的表达。 结果 与对照组相比，弓形虫代谢物作用组的小胶质细胞胞体变圆，突起减少；流 式结果显示BV-2细胞感染弓形虫24 h且BV-2细胞与弓形虫速殖子比例为1:1时出 现凋亡，培养48 h ,BV-2细胞与弓形虫速殖子比例为1:5时BV-2细胞的凋亡率达 35.72%；弓形虫代谢物作用组的BV-2细胞分泌炎症因子，其中培养上清中IL-1β、 IL-6、TNF-α、NO的含量、BV-2细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS mRNA的表达以 及iNOS蛋白的表达均随着培养