粪肠球菌胶原黏附素基因转化变异株在留管相关泌尿道感染中的致病作用-病原生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中英文对照………………………………………………………………………. 4 中文摘要…………………………………………………………………………..5 英文摘要…………………………………………………………………………..7 前言………………………………………………………………………………..9 材料和方法…………………………………………………..……………………11 结果…………………………………………………………..…………………..22 讨论……………………………………………………………………………....32 小结………………………………………………………………………………34 参考文献…………………………………………………………………………36 致谢………………………………………………………………………………38 综述………………………………………………………………………………39 - 3 - 中英文对照 英文缩略语 EDTA IL-6 GM-CSF MIP-1α PE TTC Tris PBS PCR E.faecalis Ace HE LB rpm KD CFU 英文全称 Ethylene DiaminetetraaceticAcid Interleukin-6 GM-colony stimulating factor Macrophage inflammatory proteint Polyethylene 2,3,5 monochloride triphenyl four azole nitrogen Tris-hydroxymethyl aminomethane phosphate—buffered saline polymerASe chain reation Enterococus faecalis Collagen binding protein adhesion Hematoxylin eosin Luria-Bertain medium Revolution per minute kiodalton Colony Forming Unit 中文全称 乙二胺四乙酸 白细胞介素 6 粒巨噬细胞集落刺激因子 巨噬细胞炎症蛋白 1α 聚乙烯 2，3，5 一氯化三苯基四 氮唑 Tris 盐缓冲液 磷酸盐缓冲液 聚合酶链式反应 粪肠球菌 胶原结合蛋白黏附素 苏木素-伊红 LB 培养基 转/分 千道尔顿 菌落形成单位 - 4 - 粪肠球菌胶原黏附素基因转化变异株在留管相关 泌尿道感染中的致病作用 中文摘要 目的：构建粪肠球菌胶原黏附素 ace 基因转化变异株；建立小鼠留管相关泌 尿道感染模型；探讨粪肠球菌 ace 基因在生物膜形成及泌尿道感染中的致病作 用，为防治耐药肠球菌感染研究奠定基础。 方法： 1.粪肠球菌 ace 基因转化变异株的构建及鉴定： 用 PCR 方法筛选 ace-粪肠球菌野生株 N8 ace-（壮观霉素敏感）；采用简便 法（CASsuper O ne-Step Competent Cell Preps K it）处理粪肠球菌 N8 ace-，使其成 为感受态细胞；提取大肠杆菌 XL1-Blue pTEX5646 质粒（pAT 392 穿梭质粒， 含整段 ace 基因片段，携壮观霉素抗性）；通过电转化方法将质粒 pTEX5646 转 入粪肠球菌 N8 感受态中，将电击混合液接种至 SR 选择培养基上培养，挑选菌 落进行药敏试验、PCR 鉴定； 2.小鼠留管相关泌尿道感染模型建立及评价 通过铂固化硅胶管与胰岛素针头于小鼠膀胱中注 50ul 粪肠球菌标准株 ATCC29212 菌液（1.5×109cfu/ml）并留置硅胶管 24h，脱臼处死小鼠，通过膀胱 GM-CSF、IL-6、MIP-1a 等细胞因子检测和 HE 染色病理切片评价模型的建立。 3. 粪肠球菌ace基因阴性野生株及阳性转化变异株在体外黏附能力的比较 挑取野生株 N8ace-和转化变异株 N8ace+接种到 5 ml ELB 液体培养基中； 分别 37℃和 46℃ 250 rpm 摇菌 16 h；菌液 100 ul 分别接种到 96 孔板，孵化、 番红染色、漂洗、干燥后用酶标仪测定孔板底部 OD 值（OD595）；通过测定 OD 值，比较 ace 基因阴性野生株与转化变异株在体外的早期黏附能力。 4.粪肠球菌 ace 基因阴性野生株及阳性转化变异株在小鼠留管相关泌尿道感 染模型中的致病作用比较 比较野生株与转化变异株在小鼠膀胱和硅胶管表面细菌计数、细胞炎症因子 及病理切片的差异；同时用扫描电镜比较导尿管和膀胱表面粪肠球菌黏附聚集情 - 5 - 况的差异。 结果： 1. 粪肠球菌ace基因变异株接种于含有