分化相关基因NDRG1对人肿瘤细胞的体外生物学效应研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

万方数据 万方数据 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立 进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意 识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许 论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存和汇编本学位论文。 必威体育官网网址□，在_年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不必威体育官网网址□。 （请在以上方框内打“√”） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 上海交通大学硕士学位论文 缩略表 缩略词 BrdU（Bromodeoxyurdine） HCC ( Hepatocellular carcinoma ) 溴脱氧尿苷 肝癌 cDNA ( Complementary DNA ) 互补 DNA DEPC ( Diethyl pyrocarbonate ) 二碳酸二乙酯 DMSO ( Dimethyl sulfoxide ) 二甲基亚砜 DNase ( Deoxyribonuclease ) 脱氧核糖核酸酶 CDK ( cyclin dependent kinase ) 细胞周期蛋白依赖 激酶 EB ( ethidium bromide ) 溴化乙锭 FBS ( fetal bovine serum ) 胎牛血清 HRP ( peroxidase, horseradish ) 辣根过氧化物酶 mRNA ( messenger RNA ) PCR（Polymerase chainreaction） TUNE （TdT-mediated dUTP nick end labeling） 信使 RNA 聚合酶链是反应 原位末端转移酶标记 技术 PBS ( Phosphate buffered solution ) 磷酸盐缓冲液 PCNA ( Proliferating cell nuclear antigen ) 增殖细胞核抗原 PCR ( Polymerase chain reaction ) 聚合酶链式反应 上海交通大 上海交通大学硕士学位论文 摘要 分化相关基因 NDRG1 对人肿瘤细胞的 体外生物学效应 摘要 研究背景和目的：分化相关基因 NDRG1（N-Myc downstream-regulated gene1） 属于 N-myc 下游调节基因蛋白家族一成员，因在 N-myc 全身性敲除的小鼠胚胎组 织中高表达而得此名。NDRG1 表达于多种肿瘤组织中，如肺癌、食管癌、乳腺癌、 肝癌、前列腺癌、肾癌结肠癌；在某些肿瘤中，NDRG1 的表达水平与细胞分化程 度、临床分期、转移和侵袭有关。然而，目前人们对 NDRG 1 在肝肿瘤和肠肿瘤中 的表达的生物学意义仍不十分清楚。本研究旨在探讨 NDRG1 对人肝癌和肠癌细胞 生长的体外生物学效应。 实验结果：初步分析了 15 对肝癌和癌旁组织及不同肝癌和肠癌细胞系中 NDRG1 的表达情况，发现 NDRG1 在人肝癌组织样本中的 mRNA 表达显著高于相应的癌旁 组织；在多数的肝癌和肠癌细胞系中，NDRG1 蛋白有一定水平表达。为进一步研 究 NDRG1 的功能，利用慢病毒系统将 NDRG1 表达单元转入人肝癌细胞系 Huh7、 SMMC-7721 和人肠癌细胞系 SW620、HCT8 中，并建立了相应的过表达稳定细胞 系。MTT、克隆形成和细胞周期结果显示，在细胞贴壁培养条件下，过表达 NDRG1 并不影响上述肝癌细胞生长与增殖；而在非贴壁培养条件下，NDRG1 表达却可显 著地抑制肝癌细胞的失巣凋亡，相伴随的是磷酸化的 AKT 和 p-38MAPK 水平增高； 在 HepG2 和 Hep3B 细胞中，敲降 NDRG1 表达促进这两种肝癌细胞的失巢凋亡。 在细胞贴壁培养下，过表达 NDRG1 并不影响肠癌 HCT8 和 SW620 细胞的生长与增 殖，但能够抑制细胞的失巢凋亡；敲降 NDRG1 表达可诱导 HCT116 细胞发生凋亡， 并可抑制细胞中 Bcl-xl 的表达。 相应的是， 敲降 NDRG1 表达可以促进肠癌细胞 HCT116 和 Lovo 细胞的失巢凋亡。 I 实验结论：NDRG1 参与调控人肝癌和肠癌细胞的生存。NDRG1 可抑制肝癌及肠 癌细胞发生失巣凋亡。N