NEB产品知识和市场培训课程演示文稿.PPTVIP

NEB 产品知识和市场培训 2001年8月 市场与技术支持部 第三部分 NEB英文目录附录的内容介绍 NEBcutter V1.0 内容一 分子生物学数据库索引 REBASE 限制性内切酶数据库 3100种限制性酶的相关信息 酶的基因序列、甲基化敏感位点、结构…… 5600篇参考文献 InBase 内含肽数据库 分子生物学数据库网址总汇 224个网址 可按功能领域分类查找 内容二 工具酶常用查询表 以酶识别序列分类的索引 同裂酶索引 限制性内切酶的发展历史和知识背景 NEBuffer的酶 － 活性对照表 双酶切缓冲液选择表 酶－稀释液对照查询表 限制性酶在引物延伸反应中的活性表 限制性核酸内切酶的热失活对照表 酶切反应酶用量查询表 补平反应新酶识别位点查询表 相同粘端酶查询表 限制性酶识别位点中甲基化位点查询表 内容三 分子生物学常用工具表 常用E.coli菌株表型及基因型查询表 常用遗传标记 NEB菌株描述 遗传密码表 氨基酸化学结构 常用单位换算 常用载体上的酶识别位点出现频率 常用载体的酶切图谱 第一部分 NEB厂家背景回顾 美国总部： Beverly, MA 1975~2001 支柱产品——工具酶 先进的基因克隆和高表达体系的构建技术 120种自主开发的酶 60多种酶是由NEB首先筛选到并进入商品化生产 二十五年的生产历史 国际化的生产和营销网络 在全世界35个国家和地区有分销商 美国、英国、德国、加拿大四个生产基地 专业水准的厂商 发酵中心——生产部 酶制备和DNA重组技术中心——研发部 分子生物学和寄生虫学研究中心——基础研究院 第二部分 NEB 产品讲解 核酸工具酶 DNA限制性内切酶 DNA聚合酶、逆转录酶 Vent系列的PCR聚合酶 DNA/RNA修饰酶 单位的定义 在50?l反应体系中，1小时内，完全消化1?g的DNA所 需要的酶量为1 Unit 包装与规格 常用酶大多数为10 U/?l 缓 冲 液 4种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液 稀 释 液 分为A、B、C三种，依表询 储 藏 条 件 在不被稀释的情况下，可长期存放在 零下20度长达20之久 DNA限制性内切酶 严格的质量检验： 非特异性的内切酶活性检测 核酸酶污染检测 外切酶污染检测 蓝白斑筛选检测 DNA限制性内切酶 针对于常用在克隆实验中的酶 检验过量酶切对DNA末端的完整性是否有破坏 NEB自主克隆的酶基因 从重组菌株中提纯的酶 随酶另附一管BSA 酶识别位点被dam或dcm甲基化后不能被切动 酶是否耐热 经过蓝白斑法检测 目录书中出现的标志符号的含义 最佳的工具酶反应温度 酶所对应的缓冲液编号 DNA限制性内切酶 Homing 核酸内切酶 识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶 同裂酶的概念 识别同一酶切位点的一组内切酶 BSA的作用 酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性 DNA限制性内切酶 小常识： NEB限制性内切酶的卖点： 种类非常齐全，（丰富的稀有酶） 稳定性好，存放时间长 价格在进口酶类里适中 质量可靠 DNA限制性内切酶 DNA/RNA聚合酶 DNA或RNA的探针标记 3’末端和5’末端的补平 3’末端的碱基置换 DNA测序反应、定点突变和转录 3’末端突出的切平 特 性：以单链DNA或RNA为模板，从5’端向3’端合成新链 应 用 性能指标： 5’端向3’端的外切活性 3’端向5’端的外切活性 聚合速度 错配率 耐热性 延伸能力 常用的种类： E.coli DNA Polymerase I Klenow Fragment （3’—5’ exo-） T4 DNA Polymerase Terminal Transferase M-MuLV Reverse Transcriptase *M-MuLVReverse Transcriptase （RNase H-） T7/Sp6 RNA Polymerase DNA/RNA聚合酶 NEB Vent系列聚合酶 Vent DNA Polymerase 主要应用：常规PCR扩增 双脱氧法测序 NEB Vent系列聚合酶 Vent DNA Polymerase 与常规Taq酶的错配率比较 卖点： 高保真 耐热性非常好 DNA/RNA 修饰酶 DNA / RNA Modifying Enzyme 连接酶 …………………………Ligase 激酶 ……………………………Kinase 碱性磷酸酶 ……………………Phosphatase Beta琼脂糖酶 …