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本文以绿豆［13］为材料，采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，研究其POD 和SOD同工酶在不同超声波处理下的变化情况，探讨超声波对同工酶活力和组成 的影响。 2材料与仪器 2.1材料 绿豆种子(Mung bean seeds),山*场购得新鲜绿豆种子500g。 2.2试剂 2.2. 1 pH7. 0 0. 05mol/L 磷酸缓冲液： 0. 2mol/L Na2HP04:71.64g/L 0. 2mol/L NaH2P04:31. 21g/L ? 0. 2mol/L pH 7.0: 700ml A+300ml B- ?定容到IL. ? 0. 2mol/L pH 7. 0 磷酸缓冲液 300ml+蒸馏水 900ml PH7.0 0. 05mol/L磷酸缓冲液. 配至1200ml pH7. 8 0. 05mol/L磷酸缓冲液： 0. 2mol/L Na2HP04:71. 64g/L 0. 2mol/L NaH2P04:31. 21g/L 0. 2mol/L pH 7.8: 915ml A+85ml B 定容到 IL. 0. 2mol/L pH 7. 0 磷酸缓冲液 300ml+蒸馏水 900ml 配至 1200ml PH7.8 0. 05mol/L磷酸缓冲液. pH7. 8 3. 6*10_2mol/L 磷酸缓冲液: 0. 2mol/L Na2HP04:71. 64g/L 0. 2mol/L NaH.POHSl.Slg/L 0. 2mol/L pH 7.8: 915ml A+85ml B 定容到IL. 0. 2mol/L pH 7. 0 磷酸缓冲液 200ml+蒸馏水 920ml 配至 1120ml pH7. 8 3. 6*10-2mol/L 磷酸缓冲液. pH6.0 0. lOmol/L 磷酸缓冲液： 0. 2mo1/L Na2HP04： 21. 492g/300ml 0. 2mol/L NaH2PO4:9. 363g/300ml 0. 2mol/L pH 7.0: 135ml A+165ml B 定容到 300ml. 0. 2mol/L pH 7. 0 磷酸缓冲液 300ml + 蒸馏水 300ml 配至 600ml PH6.0 0. lOmol/L磷酸缓冲液. 2.2.2考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 lOOmg溶于50ml95%乙醇中，加入 100ml85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0. 01%(W/V) 考马斯亮蓝G—250, 4.7%(W/V)乙醇。 2.2.3标准蛋白质溶液：结晶牛血清蛋白(BSA),用0. 15mol/LNaCl配制成 0.lmg/ml 蛋ft溶液。 2.2.4连苯三酚试剂： 连苯三酚 630 mg+100 ml 10 mmol/L HC1 (0. 085 ml 36%的浓 HC1 ,用蒸馏 水配成100 ml).定容到500ml. 2. 5 pH 8. 30 50 mmol/L Tric-HCl: 0. 1 mol/L Tris: 12. 114g 1000 ml (储备液) 0. 1 mol/L HCL:浓盐酸稀释得到(8.5 ml 36%的浓HC1 ,用蒸馏水配成 1000 ml)(储备液) 0. 05mol/L pH 8.3: 50ml A+19. 9ml B 定容到 100ml. 2.2.6 POD酶活力测暈的反应混合液：lOOmmol/L磷酸缓冲液(pH6. 0)50ml ?丁.烧 杯中，加入愈创木酚28ul,于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解待 溶液冷却后，加入30%过氧化氢19ul,混合均匀，保存于冰箱中。 2.2.7聚丙烯酰胺凝胶系统的配制 A 液:lmol/L HC1 48.0 毫升，Tris36.6 克,TEMED 2 毫升，加水至 100 毫升，pH8.9o B液：丙烯酰胺56克；甲叉双丙烯酰胺1.47克加水至200毫升。 （3） C液:过硫酸铵（用前配制）2.8%,配100ml。 2.2.8电极缓冲液配制：THs6. 06克，甘氨酸25. 82克，加水至1000毫升、 PH8. 3、使用时稀释10倍。倒入电极缓冲液时应将电泳槽倾斜，缓慢倒入， 并同时缓慢将电泳槽放平，以驱除凝胶卜*方的气泡。 2.2.9抗坏血酸-联苯胺过氧化物酶染液：抗坏血酸70. 4mg,联苯胺溶液（2g 联苯胺溶于18ml用文火加热的冰醋酸中再加蒸馏水72ml） 20毫升，3% H202 4毫升，H20 76毫升。 2.2.10溴酚蓝染液：溴酚蓝lmg,溶于100ml蒸馏水中。 2.2.11脱色液配制：甲醇5ml,冰醋酸9ml,加蒸馏水配成100ml 12 其他试剂：联苯胺、氮蓝四唑（NBT）、核黄素、氰化钾（KCN）、EDTA 二钠盐、PEG6000、固体硫