用荧光葡聚糖研究大麦细胞电融合.PDFVIP

第 7 卷 　第 1 期 电化学 Vol. 7 　No. 1 2001 年 2 月 EL ECTROCHEMISTR Y Feb. 2001 文章编号 (2001) 用荧光葡聚糖研究大麦细胞电融合 王明艳 ,龚叶芳 ,江志裕 (复旦大学化学系 ,上海 　200433) ( ) 摘要 : 　利用阴离子表面活性物质荧光葡聚糖 FDX 研究了表面活性物质对大麦细胞电融合的 影响. 结果表明 ,FDX 可抑制电融合过程. 对放置过大麦细胞原生质体的 FDX 溶液 ,在荧光显微 镜下可观察到其膜表面的荧光圈 ,证明 FDX 在膜上的吸附. 添加 FDX 可增加原生质体的电泳速 度 ,说明吸附后原生质体表面负电荷增多. 由于相互间静电斥力的增强,使细胞的电融合率下降. 此外 ,还利用荧光显微技术研究了细胞电生孔现象. 观察到经电脉冲后溶液中的 FDX 可进入原生 质体内部 ,间接证明了细胞电生孔的存在. 大麦原生质体 ;细胞电融合 ; 电生孔;膜吸附 ;荧光葡聚糖 关键词 : 　 中图分类号: 　O646 ;Q67 　　　　　　　　　文献标识码 : 　A 细胞电融合是利用电场作用促进细胞融合的过程. 与通常用化学物质引起的细胞融合相 比,它具有更高的效率. 电融合可使两个细胞融合为一,乃生物工程中的有效方法之一[1 ,2 ] . 前 文曾报导添加剂对大麦细胞电融合的影响[3 ,4 ] ,结果表明阳离子表面活性物质能促进细胞电 融合 ,而阴离子则相反 ,作者认为这是由于表面活性物质在大麦细胞原生质体膜上的吸附所引 起的. 为了证明表面活性物质在细胞原生质膜表面的吸附 ,本文以荧光葡聚糖作为添加剂 ,并 由共聚焦荧光显微镜进行观察和研究. 电生孔是细胞在脉冲电场下的一种特殊现象. 直流脉冲电场的作用可使细胞膜上产生瞬 间的小孔. 这种现象可用于将周围介质中的物质引入细胞内部 ,如 DNA 的引进 , 以改变细胞 的性质. 在脉冲电场下 ,如若相邻两细胞的电生孔互相贯通 ,则将引起两细胞的融合. 由于脉冲 时间很短 ,难于直接捕捉电生孔的图象 ,本文利用添加荧光葡聚糖 ,在共聚焦荧光显微镜下观 察经电脉冲处理过的大麦细胞原生质体内部的变化 ,间接研究这一现象. 1 　实　验 从大麦叶中取得细胞原生质体的方法和细胞电融合的步骤同前文[3 ] 所述. 大麦细胞原生 质体保留在 0. 5 mol/ L 甘露醇溶液中待用. 实验采用微金栅电极电融合池. 其制作工艺是先在 玻璃片上真空蒸镀铬膜 ,其上再镀金膜 ,然后用光刻工艺制成间隔为 0. 2 mm 的微栅型电极. 实验仪器为 XFD8 型低频信号发生器 ,DF1645 型高频信号发生器和 Leica TCS N T 型共聚 ( ) 焦激光扫描荧光显微镜等. 实验所用试剂为分析纯 ,荧光葡聚糖 FDX 的分子量为133 000. 用重蒸馏水配制溶液. 于室温下进行实验. 收稿日期 ;修订日期 　通讯联系人 ; 目前工作单位:连云港市化工高等专科学校化工系 ; 复旦大学生命科学院 ( ) 基金项目 : 国家自然科学基金 资助项目 ·26 · 电 　化 　学 2001 年 　　大麦细胞原生质体的电融合率用 F = ( N bN a) / N b 表 示 ,式中 N b 为原先相