糖尿病大鼠心肌对缺血再灌注损伤耐受性的研究.docVIP

糖尿病大鼠心肌对缺血再灌注损伤耐受性的研究 　　摘要：目的 探讨在体糖尿病大鼠心肌对缺血再灌注损伤（IRI）的耐受性。方法 单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠模型，取非糖尿病大鼠及糖尿病大鼠各12只，适应性饲养4w后随机分为非糖尿病假手术组（N-Sham组）、非糖尿病缺血再灌注组（N-IR组）、糖尿病假手术组（D-Sham组）、糖尿病缺血再灌注组（D-IR组）。连续监测血流动力学指标左室收缩压（LVSP）及左室舒张末压（LVEDP），比色法测血浆肌酸激酶（CK）活性，电镜观察线粒体结构。结果 与假手术组比较，N-IR组与D-IR组均出现LVSP下降，LVEDP升高，CK活性升高，差异有统计学意义（P0.05），线粒体结构损伤未见明显改善及恶化。结论 4w糖尿病大鼠心肌对缺血再灌注损伤的耐受性与非糖尿病大鼠比较无明显差异。 　　关键词：心肌保护；糖尿病；缺血再灌注损伤 　　缺血性心脏病近年来发病率不断上升，已成为导致人类死亡的主要原因。早期使闭塞的冠脉恢复灌注是挽救濒临坏死的心肌的主要治疗方法，但不得不面对另一个难题～缺血再灌注损伤（ischemia and reperfusion injury，IRI）。糖尿病被认为是急性心脏缺血事件的独立高危因素[1]，同样也是心血管意外及冠脉重建手术预后不良的重要危险因素[2]。目前糖尿病患心脏对IRI的耐受性尚有争议。本研究通过复制在体糖尿病大鼠心肌缺血再灌注模型，比较观察左室收缩压（left ventricular systolic pressure，LVSP）、左室舒张末压（left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP）、血浆肌酸激酶（creatinekinase，CK）活性及线粒体超微结构，研究糖尿病大鼠心肌对IRI的耐受性。 　　1 资料与方法 　　1.1主要试剂及仪器 链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，Sigma公司）；肌酸激酶（CK）检测试剂盒（南京建成生物科技有限公司）；HX-300S小动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；BL-420S生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；透射电镜FEI（美国）。 　　1.2实验动物 清洁级健康雄性SD大鼠（由徐州医学院实验动物中心提供），体重250～300g。实验操作过程严格遵循有关实验动物保护规定。 　　1.3方法 　　1.3.1糖尿病模型的制备 所有大鼠禁食12h，腹腔注射2%STZ（以PH 4.2、0.1mmol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液溶解），60mg/Kg单次性腹腔注射[3]，72h后取尾静脉血连续监测空腹血糖，血糖16.7mmol/L，并出现糖尿病三多一少症状（多饮、多食、多尿、体重减轻）视为造模成功，非糖尿病大鼠腹腔注射等体积柠檬酸钠缓冲液作为对照，后不限饮水，普通鼠粮自由进食，适应性饲养4w。 　　1.3.2心肌I/R模型制备 大鼠经10%水合氯醛麻醉成功后仰卧位固定，监测Ⅱ导联心电图变化，腹腔注射肝素500U/Kg，气管切开，小动物呼吸机辅助通气，PE-50导管经右颈总动脉逆行插入左心室（插管成功可见动脉波形变为基线为零的正弦波形），接压力换能器监测血流动力学。沿胸骨左缘打开胸腔，暴露心脏，在左心耳根部与肺动脉圆锥间下方约2mm处进针穿线，在线环内放置3mm长的硅胶管，6/0线结扎并将线结系在硅胶管表面，结扎冠脉左前降支（left anterior descending coronary artery， LAD），缺血30min，剪开线结再灌注120min。常规心电图监测心肌缺血变化，以结扎后ST段抬高（或心电图QRS波突然增高、增宽或T波高耸），心肌紫绀，松扎后ST段下降1/3以上，心外膜充血者为合格模型。 　　1.3.3实验分组 取非糖尿病及糖尿病大鼠各12只，随机分为4组：非糖尿病假手术组（N-Sham组）、非糖尿病缺血再灌注组（N-IR组）、糖尿病假手术组（D-Sham组）、糖尿病缺血再灌注组（D-IR组），每组6只。假手术组只穿线，不结扎冠状动脉。 　　1.3.4结果采集 ①各组均于缺血前（T0）、缺血30min（T1）及再灌注120min（T2）时记录左心室收缩压（left ventricular systolic pressure，LVSP）、左心室舒张末压（left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP）；②再灌注120min时经左心室取血2ml，2500r/min离心10min，离心半径6cm，取上层血浆放于-80℃冰箱中保存，待标本收集完毕后严格按照试剂盒说明一同测定CK活性；③实验结束时，处死大鼠迅速取下心脏，在结扎线下方取下一小块心肌组织，切成1×1×