二甲双胍对裸小鼠肝细胞癌移植瘤的增殖抑制作用内科学专业论文.docxVIP

摘要 背景及目的 二甲双胍为双胍类口服降糖药, 是一种广泛使用的主要针对 2 型糖尿病治疗的一线药 物。近年来研究显示，二甲双胍不仅有降血糖作用，还有抗肿瘤的生物效应，并能降低肿 瘤的发病率和病死率。研究已经证明二甲双胍能抑制结肠癌、乳腺癌、前列腺癌细胞的增 殖，其重要机制之一是激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）， 并诱导细胞周期停滞。然而有关二甲双胍对肝细胞癌细胞增殖抑制、细胞周期停滞及其机 制的报道不多，对裸小鼠肝细胞癌移植瘤是否具有增殖抑制作用及其机制也未见报道。我 们前期的体外研究已经发现二甲双胍可以诱导肝细胞癌细胞株细胞周期停滞和增殖抑制， 本实验是在体外研究结果的基础上，进一步对二甲双胍对裸小鼠肝细胞癌移植瘤的增殖抑 制作用及分子机制进行研究，为二甲双胍成为抗肿瘤药物以及临床上预防和治疗肝细胞癌 提供新的理论基础。 材料和方法 1. 用含 10%胎牛血清、100U/ml 青霉素和 100U/ml 链霉素的 RPMI-1640 培养基培养人 肝癌细胞株 PLC/PRF/5 细胞。 2. 将 8 周龄雌性裸小鼠随机分为 2 组（实验组、对照组），实验组用二甲双胍工作液灌 胃（160mg/Kg·d）、对照组用等体积的生理盐水灌胃，1 周后将人肝癌细胞株 PLC/PRF/5 细胞（1×106 个/点）接种在裸小鼠皮下，建立裸小鼠肝细胞癌移植瘤动物模型。继 续灌胃 7 周后处死，计算成瘤率并取肝细胞癌移植瘤组织称重、Western Blot 分析及 病理解析。 3. Western Blot 检测经二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织 AMPK 磷酸化程度。 4. 免疫组织化学染色观察经二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织 Ki-67、cyclin D1、 P27kip1 的表达，并应用 Leica IM50 图像采集系统和 ImageJ 软件对免疫组织化学染色 的结果进行定量分析。 5. 观察灌胃前后裸小鼠的体重、血糖变化。 6. 实验数据分析和处理：用 SPSS17.0 软件，对成瘤率使用卡方检验，其余数据使用两 个独立样本的 t 检验进行统计学分析。 结 果 1. 二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤成瘤率显著性降低。 2. 二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤平均重量显著性降低。 3. 二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织中增殖活性因子 Ki-67 表达程度显著性降低。 4. 二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织 AMPK 磷酸化程度显著性增强。 5. 二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织 cyclin D1 表达显著性降低，P27kip1 表达显著性增 强。 6. 二甲双胍对裸小鼠体重及正常血糖水平无显著性影响。 结 论 二甲双胍通过磷酸化激活 AMPK，下调细胞周期调节蛋白 cyclin D1，上调细胞周期 蛋白依赖性激酶抑制因子 P27kip1 的表达，抑制细胞周期，进而抑制裸小鼠肝细胞癌移植瘤 的增殖活性。 关键词：二甲双胍；肝细胞癌移植瘤动物模型；AMPK；细胞增殖；细胞周期调节蛋白 Abstract Background and Objectives The biguanide antihyperglycemic drug, metformin is the most widely used for the treatment of type 2 diabetes mellitus. In recent years, the researches have shown that metformin not only reduces the blood glucose levels, but also plays an important role in anticarcinogenesis. Studies demonstrated metformin inhibits the proliferation of colon、breast and prostate cancer， which is involved in inducing cell cycle arrest by activating AMPK(AMP-activated protein kinase，AMPK) . But there is rare report about whether or how metformin inhibits growth of hepatocellular carcinoma cell and affects the cell cycle.It has not been reported whether metformin inhibits growth