从β 内啡肽的表达探讨华蟾素治疗癌痛的外周机制研究-药理学专业论文.docx

三峡大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作 所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经 发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明 确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 学位论文作者签名： 日 期： 三峡大学研究生知识产权承诺书 本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究 工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。 本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部 或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊 发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位， 并事先征得导师或学校相关部门的同意。 我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。 学位论文作者签名： 日 期： I 内 容 摘 要 目的：本课题旨在建立小鼠后足癌痛模型的基础上，从 β-END 的表达初步探讨 华蟾素治疗癌痛的外周机制。 方法：1、小鼠后足癌痛模型的制作：选择22只雌性昆明小鼠，向右后足足底注 射H22肝癌细胞悬液，同时向左后足足底注射生理盐水作为对照，每只小鼠的右足和 左足在造模前、造模后第2、4、6、8、10、12、20、30天分别进行后足痛行为和足肿 胀测定，并按照一定时间颈椎脱臼处死小鼠取其右足做HE染色，进行形态学观察。 2、华蟾素治疗癌痛模型小鼠的外周机制：将60只雌性昆明小鼠随机分为正常对 照组、模型组、华蟾素组、华蟾素联合NAL-M组和吗啡组，每组12只。除正常组的 小鼠的右后足注射生理盐水外，其余各小鼠的右后足足底均注射H22肝癌细胞悬液。 从造模第9天开始给药，正常对照组腹腔注射生理盐水，后足癌痛模型组分别用生理 盐水联合生理盐水腹腔注射、华蟾素注射液联合生理盐水、华蟾素注射液联合外周阿 片受体拮抗剂NAL-M和吗啡联合生理盐水，连用8天；各组小鼠在造模前、造模后第 2、4、6、8天以及给药第2、4、6、8天分别进行后足痛行为测定。给药的最后一天称 取体重、痛行为测定结束后，处死动物，取标本检测。取脾和胸腺并称重，计算脾和 胸腺指数。按组织切片要求留取右后足肿瘤及周围组织标本；用ELISA法测定右后足 肿瘤及周围组织匀浆液和血浆中β-END、CRF、IL-1β的含量；免疫组化法检测右后足 肿瘤及周围组织中β-END、POMC和μ-阿片受体的表达。 结果：1、小鼠后足癌痛模型的制作结果：与左后足比较，右后足既表现了热痛 觉过敏，又表现出了机械性痛觉过敏，同时还出现了“镜像痛”现象。后足的形态学 观察发现，右后足癌细胞最终侵润到骨。 2、痛行为测定结果：与正常对照组比较，模型组右后足在造模后的第4天既表现 了热痛觉过敏（p0.01），又表现出了机械性痛觉过敏（p0.01）。华蟾素可显著改 善癌痛小鼠的痛行为，显著的提高模型鼠的热痛觉阈值和机械性痛阈值（p0.05或 p0.01），但没有吗啡的起效作用快而强。而外周阿片受体拮抗剂NAL-M能够消除华 蟾素的镇痛作用。 3、脾和胸腺指数测定结果：与正常对照组比较，模型组的脾和胸腺指数显著地 降低（p0.05或p0.01）。华蟾素可显著提高癌痛小鼠脾和胸腺指数（p0.05或p0.01）。 4、右后足肿瘤及周围组织匀浆和血浆中β-END、CRF、IL-1β的含量测定结果： 与正常对照组比较，模型组肿瘤及周围组织匀浆中的CRF、IL-1β的含量可显著增高 （p0.05或p0.01）。相比之下，β-END的含量则显著降低（p0.05或p0.01）。华 蟾素可显著提高肿瘤及周围组织匀浆中的β-END、CRF的含量（p0.05或p0.01）， II 而对血浆中β-END、CRF、肿瘤及周围组织匀浆和血浆中的IL-1β的含量影响较小。 5、右后足肿瘤及周围组织中β-END、POMC和μ-阿片受体的表达结果：免疫组化 结果显示，正常对照组中的小鼠足组织中β-END、POMC和μ-阿片受体的表达均较高， 而癌痛模型小鼠的足肿瘤及周围组织中的β-END、POMC和μ-阿片受体的表达显著下 降，且与正常组比较，具有显著统计学意义（p0.01）。而华蟾素则可显著地提高癌 痛小鼠肿瘤及周围组织中β-END、POMC和μ-阿片受体的表达，且与模型组比较，具 有统计学意义（p0.01）。 结论：1、本实验制备的癌痛模型既表现了热痛觉过敏，又表现出了机械性痛觉 过敏，同时还出现了“镜像痛”现象。后足的形态学观察发现，右后足癌细胞最终侵 润到骨，说明该癌痛模型制备较为成功，可作为研究治疗癌痛药物的模型。 2、华蟾素能够改善癌痛模型小鼠的症状，显著提高癌痛