实验一细菌形态结构观察.pptVIP

* * 医学微生物学实验 Experiment of Medical Microbiology 基础医学院病原生物学教研室 基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室 杨致邦 2010.1 教材 高等医学院校基础医学实验教学系列教材 ?病原生物学实验? 科学出版社，2008年6月 主编 杨致邦 叶彬 掌握病原生物学的基本方法与基本操作技术； 强化实验室生物安全观念， 掌握无菌操作技术； 加深对病原生物学基本理论知识的理解与认识； 培养独立操作、独立观察和思考、独立分析问题和解决实际问题的能力； 增强科技创新能力； 培养严谨的作风、科学的方法和严肃认真的工作态度。 实验教学的目标 临床医学本科实验内容及安排 有 需要 4 四体、真菌、病毒 6 　 需要 4 白喉杆菌、厌氧菌 5 有 　 4 肠道杆菌 4 有 需要 4 致病性球菌 3 有 　 4 细菌的生长现象与消毒灭菌 2 　 需要 4 细菌形态观察 1 录像 显微镜 学时数 实验课的带教内容 临床药学本科实验内容及安排 有 需要 4 四体、真菌、病毒 6 　 4 药物的敏感性实验 5 4 药物的微生物检测 4 有 需要 4 致病性球菌 3 有 　 4 细菌的生长现象与消毒灭菌 2 　 需要 4 细菌形态观察 1 录像 显微镜 学时数 实验课的带教内容 非临床医学本科实验内容及安排 有 需要 4 四体、真菌、病毒 3 有 　 4 细菌的生长现象与消毒灭菌 2 　 需要 4 细菌形态结构的观察 1 录像 显微镜 学时数 实验课内容 实验一 细菌形态结构的观察 Observe on Morphology and Structure of Bacteria 【目的要求】 1.熟悉实验室生物安全规则,掌握无菌操作技术； 2.掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法； 显微镜(油镜)下细菌形态的观察; 革兰染色结果判断； 3.掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的形态特点。 【实验内容】 1.实验室生物安全规则(P3) ； 2.细菌标本革兰染色观察（Gram’s Stain)(每人做） (P10) ； 3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）； 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜） (P104) 。 【实验材料】 (1)菌种: 葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。 (2)试剂:革兰染色液。 (3)其他: 生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯等。 【实验方法】 1．细菌涂片的制作 步骤： 涂片 干燥 固定 注意点： 1）无菌操作 2）加生理盐水（固体培养物） 生理盐水 生理盐水 生理盐水 + + + 葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌 载玻片 2.革兰染色 1)方法 初染: 结晶紫和碳酸氢钠各1～3滴,3s-5s，水冲净,甩干。 媒染: 碘液1～3滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。 脱色: 95%乙醇数滴,5s-10s, 水冲净,甩干。 复染: 稀释石炭酸复红液1～3滴,10s，水冲净,甩干。 关键步骤： 掌握脱色程度。 【结果观察】 指标: 形态、染色性、排列。 染色性判断： 革兰阳性菌染成蓝紫色, 革兰阴性菌染成红色。 3.观察 标本片自然干燥或在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油,油镜下观察。 Gram’s Stain,×1000 葡萄球菌: 革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列。 大肠杆菌: 革兰阴性杆菌,不规则分散排列。 Gram’s Stain,×1000 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察 注意点： 观察时只能动显微镜的微调,不要动位置。 要求： 画图记录。 1）破伤风杆菌的芽胞: 芽胞染色×1000 鞭毛染色×1000 2)变形杆菌的鞭毛: