7仪器介绍及实验技术.ppt

DEPTs COSY HSQC HMBC NOESY 调谐 在Xwinnmr/topspin中键入wobb命令，再键入acqu命令，进入采样窗口，可以看到如下的图形： 核磁共振实验技术 庞文民 探头调谐：未调好 如果探头没有配置自动调谐器必须到磁体边手动调节探头上的旋钮或拉杆；如果探头配置有自动调谐器，用atmm命令调谐 XwinNMR/Topspin命令：atmm tuning: 微调探头的共振频率 matching: 微调探头的谐振电阻 放进样品后的第一步务必先调谐探头，尤其前后样品的溶液性质不同时（如不同溶剂，盐浓度不同，等等），以保证放大器与探头在电子电路上的匹配，否则反射回放大器的功率太大会损坏放大器 没有配备自动调谐器的探头必须到磁体边手动调节探头上的旋钮或拉杆 不管何种方式，操作一定要轻，慢，不要过度 核磁共振实验技术 庞文民 调谐 核磁共振实验技术 庞文民 探头调谐：已调好 键入stop命令停止 f 锁场 所有样品必须含有锁场介质，现代谱仪一般都用氘锁，所以即便是水溶液，也要加5-10%的重水。锁场既提供场频连锁机制，及时补偿磁场的漂移，也为匀场提供一个手段。 必要时键入rsh命令读入合适的匀场文件 必要时键入lockdisp命令，显示锁信号窗口 键入lock命令，选择合适的溶剂，进行自动锁场 核磁共振实验技术 庞文民 XwinNMR/Topspin命令：lockdisp 未锁场时 锁场后 核磁共振实验技术 庞文民 g 匀场 用BSMS键盘调节匀场，使锁线尽量升高；最常调的是Z和Z2项。 核磁共振实验技术 庞文民 ONAXIS：灯亮调轴向匀场项 STD BY：确认修改 FINE：微调／粗调 g 匀场 核磁共振实验技术 庞文民 g 匀场 核磁共振实验技术 庞文民 g 匀场 核磁共振实验技术 庞文民 g 匀场 配备梯度探头的谱仪，可以用gradshim命令进行梯度匀场 3D梯度匀场要求配备有三轴梯度或氘去耦板 1D2H梯度匀场要求配备氘去耦板 作1D/3D梯度匀场时要求样品有单一的强1H信号峰，通常是水峰，所以重水溶剂不适合 作1D2H梯度匀场时要求样品有单一的强D信号峰，重水样品可以用 核磁共振实验技术 庞文民 XwinNMR/Topspin命令：gradshim/Topspin 选择梯度匀场方式 梯度匀场过程中的锁线变化 启动梯度匀场 预先作过梯度Map后才能进行梯度匀场 核磁共振实验技术 庞文民 XwinNMR/Topspin命令：gradshim/Topspin 核磁共振实验技术 庞文民 XwinNMR/Topspin命令：gradshim 核磁共振实验技术 庞文民 h 建立新参数 键入rpar读取参数集或eda命令进行采样参数设置，主要的采样参数包括： PULPROG：所用的脉冲序列，如zg； TD：采样的点数，如16k； PARMODE：参数的模式，对一维实验，应设为1D； NS：累加次数，视相循环的需要和信噪比而定； DS：空采样次数，用于使系统达到一个稳态； SW：谱宽，如10ppm； O1：载波频率，一般设在水峰的位置，即4.7ppm附近； RG：接收机增益（receiver gain），在不溢出的情况下可以尽量取大一些，也可以用rga来自动设定； 其它参数主要是p0-p31、d0-d31和pl0-pl31，视脉冲序列中使用了哪些来定，可以用ased命令来检查。 其中循环延迟（通常是d1）一般要大于T1,对小肽需要1秒多，大蛋白质小于1秒即可。 核磁共振实验技术 庞文民 XwinNMR/Topspin命令：eda(1D) 脉冲序列名称 数据点数（实＋虚） 累加次数 空采次数 谱宽 前放增益 观测的核 核磁共振实验技术 庞文民 XwinNMR命令：ased 如果脉冲序列不存在或用到的某些参数没有设置好，ased会报告错误，这时要先在eda中设好相关项 核磁共振实验技术 庞文民 i 采样及数据处理 开始采样：键入zg，开始实验；可以进入采样窗口看fid。如果水峰信号太大,可以不用zg而用gs命令开始实验,点击modify弹出一个参数窗口,可以一边观察Fid大小一边修改参数。 采样完毕后，对于一维谱可以键入efp进行变换，二维谱则用xfb变换。efp是一个组合命令，包括对fid进行窗函数处理（em）、傅里叶变换（ft）和调相（pk）。如果相位不好，可以键入apk进行自动调相，也可以点phase按钮进入调相窗口手工调相。 核磁共振实验技术 庞文民 XwinNMR/Topspin主窗口：phase 核磁共振实验技术 庞文民 Xwin