菲律宾蛤仔凝集素抑菌机制的研究-大连海洋大学.PDFVIP

第29卷第5期 大 连 海 洋 大 学 学 报 Vol.29 No.5 2014年10月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY Oct . 20 14 DOI:10.3969/ J.ISSN.2095-1388.2014.05.016 文章编号:2095-1388(2014)05-0508-06 菲律宾蛤仔凝集素抑菌机制的研究 佟长青, 李琦, 曲敏, 金桥, 李伟 (大连海洋大学 食品科学与工程学院辽宁省水产品加工及综合利用重点实验室, 辽宁 大连 116023) 摘要:通过分析菲律宾蛤仔Ruditapesphilippinarum凝集素 (MCL-T) 对细菌的呼吸代谢及细菌中总DNA、 总RNA和可溶性蛋白合成的影响, 以及MCL-T与金黄色葡萄球菌膜蛋白 (OMP) 的相互作用及其核酸酶 (RNase) 活性, 研究了MCL-T 的抑菌机制。 结果表明: MCL-T具有抑制金黄色葡萄球菌Staphylococcus au鄄 reus 和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis代谢过程中的磷酸戊糖途径 (HMP); MCL-T与金黄色葡萄球菌或枯草 芽孢杆菌共同培养时, 随着MCL-T 质量浓度的增加, 金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌中的总 DNA、 总 RNA和可溶性蛋白含量均呈下降趋势; 固相吸附测试表明, MCL-T可与金黄色葡萄球菌膜蛋白结合, 两 者的结合具有浓度依赖关系, 该结合位点受N-乙酰-D-半乳糖酰胺 (N-acetyl-D-galactosamine, GalNAc) 及猪胃黏蛋白 (Mucin from porcine stomach, PSM) 的抑制, MCL-T具有 RNase 活性。 研究表明, MCL-T 通过抑制细菌的呼吸代谢及细菌中总DNA、 总RNA 和可溶性蛋白来发挥抑菌作用, 同时其抑菌活性还与 凝集素的OMP结合结构域和RNase活性结构域相关。 关键词:菲律宾蛤仔凝集素; 抑菌机制; 结构域; 膜蛋白; 核酸酶 中图分类号: Q532摇 摇 摇 摇 文献标志码: A 摇 摇 目前, 已有大量文献报道了海洋贝类凝集素所 1摇 材料与方法 具有的抑菌现象, 但对于其抑菌机理的研究尚不完 1郾1摇 材料 全清楚。 抑菌剂发挥抑菌作用, 首先需要与细菌细 胞膜结合, 如具有抗菌活性的核酸酶和抗菌肽通过 MCL-T 由辽宁省水产品加工及综合利用重点 结合在细菌细胞膜上的脂蛋白受体来发挥抗菌活 实验室制备; 革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌 [1-2] ATCC25923和枯草芽孢杆菌ATCC6633取自辽宁出 性 。 凝集素可以与细菌细胞膜上的寡糖链结 合, 但凝集素结合细菌作用与抑制细菌活性不具有 入境检验检疫局; 酵母 RNA、 辣根过氧化物酶 相关性, 如贻贝凝集素 (CGL) 具有凝集和抑制枯 (Horse radish peroxidase, HRP)、 透析袋(8000- 草芽孢杆菌Bacillus subtilis、 大肠杆菌E郾coli 的作 14000)购于北京索莱宝科技有限公司; 细菌总 用, 但CGL对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus RNA快速抽提试剂盒、 细菌基因组DNA快速抽提 [3-4] 试剂盒、 细菌蛋白抽提试剂盒购于生工生物工程 却不具有凝集作用, 只具有抑制作用 。 凝集素 通过糖结合结构域来实现结合细菌的作用, 但凝集 (上海)股份有限公司; 96孔U型酶标板购于丹麦 素的糖结合结构域在其抑菌功能过程中不起决定性 NUNC公司; 其他试