项目八 药物的体外抗菌技术课件.pptVIP

药物的体外抗菌技术;学习目标;药物的体外抗菌试验：又称药敏试验，是为了检查药物的抗菌能力，主要用于筛选抗菌药物或测定细菌对药物的敏感性。 ;药物的体外抗菌试验;优点：方法简便、需时短、用药量少，不需要动物。 缺点：不能根据体外试验结果肯定或否定一个药物的抗菌作用。;所用的试验菌株应处于对数生长期，因此期的微生物对外界因素变化最敏感。 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。 ;抗菌试验的影响因素;抗菌试验的影响因素;抗菌试验的影响因素; 在实际工作中，往往可见到体外实验有作用的药物，进入机体后由于各种原因而失效，有的药物毒性很大也不能用于临床。;常用的体外抑菌试验;琼 脂 扩 散 法;纸片扩散法： 制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。 最常用的方法，适用于多种药物或一种药物的不同浓度对同一试验菌的抑菌试验，多用于新药的初筛及临床的药敏试验。 ;(二)培养基和抗菌药物纸片;试验程序;1.用接种环分别在琼脂平板上挑取形态相似 的大肠杆菌菌落4～5个，接种于3～5mL肉汤管中 2.35℃温箱培养2～8h，与标准比浊管比较，若菌液浓度太浓时，可用肉汤或生理盐水稀释至与0.5麦氏标准比浊管浊度相同 3.在15min内，用无菌棉签蘸取菌液，并在管壁上挤去多余的菌液后涂布于M-H琼脂平板上（注意：涂布要均匀、致密），待干;4. 用镊子蘸取95%乙醇并通过火焰，待烧干后再蘸取乙醇重复上述操作，共三次即可达到灭菌的效果。待冷却后，用此无菌镊子夹取不同药敏纸片，按一定间隔贴在平板的不同区域，即两纸片间距不小于24 mm，纸片距平板边缘不小于15mm。 5. 35℃温箱培养18～24h观察结果。;纸片法的原理;（四）结果判断和报告 用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。根据NCCLS标准，作出“敏感”、“耐药”和“中介”的判断。;（五）药物敏感试验结果解释 ;挖沟法： 1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种各种试验菌，沟内加入药液。 2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟的距离来???断药物对试验菌的抗菌作用强弱。 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不同试验菌的抗菌作用。;; 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一般能用于定性或初步判断其作用的强弱。 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较普遍 。 ;凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最小杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration，MBC）。 ;液体连续稀释法;MIC及MBC的测定; 在测定中草药煎剂时，由于有些煎剂颜色较深，肉眼不易分辨是否有效；需再于每管中取数环移种于适当的培养基上，经培养后观察有无细菌生长而决定之。;体外杀菌试验技术;体外杀菌试验技术;联合抗菌试验技术;纸条实验法