SDS-PAGE电泳操作流程—含考染 银染 碘染.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT 4 SDS操作流程——考染 1、准备溶液 30%聚丙烯酰胺溶液30%（w/v）Acrylamide 【组分浓度】 各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g) 30%Acr-Bis(29:1) 1000ml 100ml 29%Acrylamide(丙烯酰胺) 290g 29g 1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 10g 1g 【配制方法】 将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。 【保存条件】 4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。 1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer) 【组分浓度】1MTris-HCL 名称 用量 备注 Tris 12.1g 去离子水 80ml 浓盐酸 9ml (36%的浓盐酸)预实验已确定 去离子水 加入去离子水定容至100ml后，室温保存 【配制方法】 称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加0.7mL的浓HCL调节所需要的pH值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 【保存条件】 4℃保存。 【注意事项】 对人体有刺激性，请注意适当防护。 1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer) 【组分浓度】1.5MTris-HCL 名称 用量 备注 Tris 18.17g 去离子水 80ml 浓盐酸 3ml (36%的浓盐酸)预实验已确定 去离子水 加入去离子水定容至100ml后，室温保存 【配制方法】1L 称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。） 【保存条件】 4℃保存 【注意事项】 应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 10%十二烷基硫酸钠SDS溶液10%(w/v)SDS 【组分浓度】10%(w/v)SDS 名称 用量 备注 SDS 10g 去离子水 80ml 加入去离子水定容至100ml后，室温保存 【配制方法】 称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存 【保存条件】 室温保存 【注意事项】 对人体有害，请注意防护。 10%过硫酸铵溶液10%(w/v)AP 【组分浓度】10%(w/v) 过硫酸铵 名称 用量 备注 过硫酸铵 0.1g 去离子水 1ml 现配现用 【配制方法】 称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1mL去离子水吹打溶解，4℃保存 【保存条件】 4℃保存 【注意事项】 10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用1周左右，超过期限会失去催化作用 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液?5×Tris-Glycine buffer （SDS电泳缓冲液） 【组分浓度】 各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g) 1000ml 500ml 0.125M Tris 15.1g 1.25M glycine(甘氨酸) 94.0g 0.5%(W/V)SDS 5.0g 【配制方法】 称取15.1gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。 【保存条件】 室温保存 【注意事项】 配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。 电泳缓冲液可以回收，回收后