α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的影响及机制-药理学专业论文.docxVIP

摘 要 摘 要 目的： 利用体外细胞培养的方法观察 α-ZAL 对大鼠成骨细胞增殖、成骨细胞内 NO 含量以 及成骨细胞内 c-jun 基因的表达情况等，探讨 α-ZAL 对大鼠成骨细胞的影响，为其应用 于绝经后骨质疏松症的治疗提供理论依据。 方法： 取新生 SD 大鼠(24h)，断头处死后，用 75%的酒精浸泡消毒 10 分钟，酒精中取出 大鼠，从颈部沿头盖骨剥离皮肤，取下头盖骨,剔净、漂洗、剪碎。加入 0.25%胰蛋白酶 消化 20min 后，用 PBS 洗涤；加入 0.1%胶原酶放入 CO2 培养箱中 1h 后，加细胞培养 液，吹打均匀；实验时将细胞以 105 个/m1 的密度接种于培养板，置培养箱中培养；待 细胞贴壁，吸去培养液，换上新的培养液。将细胞分四组：正常组（加入正常培养液）、 雌激素组（加入含雌激素 10-10 mol/L 培养液）、10-7 mol/L α-ZAL 浓度组和 10-10 mol/Lα-ZAL 浓度组，加入相应药物，然后在不同时间检测以下指标： （1）流式细胞术检测不同浓度 α-ZAL 对成骨细胞凋亡的影响。 （2）试剂盒检测各组成骨细胞内 NO 含量的变化。 （3）免疫组化方法检测各组成骨细胞内 c-jun 基因的表达情况。 结果： （1）雌激素组、α-ZAL10-7 mol/L 组和 α-ZAL10-10 mol/L 组成骨细胞凋亡率均低于 正常组，其中 α-ZAL 对成骨细胞的影响要低于雌激素。 （2）各浓度 α-ZAL 均使成骨细胞 NO 含量明显增加, 24h 时随 α-ZAL 浓度增加,NO 含量也逐渐增加, 10-10mol/L 时升高作用明显。48h 结果显示：α-ZAL10-7 mol/L 和 α-ZAL10-10 mol/L 均能增加细胞中 NO 含量，但 α-ZAL10-10 mol/L 对成骨细胞的影响要 弱与 α-ZAL10-7 mol/L。 （3）10-10 mol/L E2 组，10-7 mol/L α-ZAL 浓度，10-10mol/L α-ZAL 浓度组较正常组 在胞质表达深，正常组表达较浅，说明 10-7 mol/L α-ZAL 浓度，10-10 mol/Lα-ZAL 浓度 I II II 摘 要 组可以通过 c-jun 来抑制成骨细胞的凋亡。 结论： （1） α-ZAL 能抑制成骨细胞的凋亡，促进其增殖。 （2） α-ZAL 能调节成骨细胞内 NO 含量，可能与其对成骨细胞的调节作用有关。 （3） α-ZAL 能上调成骨细胞内 c-jun 基因的表达。 关键词 α 玉米赤霉醇 成骨细胞 凋亡：c-jun NO PMOP PAGE PAGE IV Abstract Abstract Objective: The objective of this research was to clarify the efficacy of α-Zearalanol to proliferation of osteoblast, NO and expression of c-jun. Methods: Newborn SD rats were sacrificed and soaked in 75% ethanol for 10 min, and then cranium of rats were obtained. The cranium were stripped off all the soft tissue , rinsed and cut to trivial bone block under sterile condition. After digested with 0.25% trypsin for 20 min, the bone block was cultured in culture flask in incubator with 0.1% collagenase and cell culture fluid. Osteoblasts were inoculated in 96-well flat-bottomed plates at a concentration of 105/ml, then the culture plates were randomly divided into 4 groups: control group, estrogen group, 10-7 mol/L α-ZAL group and 10-10 mol/Lα-ZAL group and and treated with correspondent medicine. The follow index was measured: Effec