菌落总数大肠菌群检验范例摘要.docVIP

饼干中菌落总数与大肠菌群的测定 GB/T4789.24 食品卫生微生物学检验 糖果，糕点，蜜饯检验 项目 指标 非夹心饼干 夹心饼干 菌落总数/(cfu/g) ≤ 750 2000 大肠菌群(MPN/100g) ≤ 30 霉菌计数/(cfu/g) ≤ 50 致病菌(沙门氏菌，志贺氏菌，金黄色葡萄球菌) 不得检出 一、检测对象 散装饼干，小包装饼干 二.仪器用具 1仪器 高压蒸汽灭菌锅、电热干燥箱、恒温培养箱（36℃±1℃）、冰箱（2℃-5℃ ）、电子天平、 2用具 无菌吸量管（1mL）、放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、灭菌试管平皿(直径9cm)、刻度吸管、采样瓶、小倒管等。 三．食品的采样方法 采样应遵循无菌操作程序，采样工具和容器应无菌、干燥、防漏，形状及大小适宜。 1.即食类预包装食品 取相同批次的最小零售原包装，检验前要保持包装的完整，避免污染。 2. 散装食品或现场制作食品 根据不同食品的种类和状态及相应检验方法中规定的检验单位，用无菌采样器现场采集5倍或以上检验单位的样品，放入无菌采样容器内, 采样总量应满足微生物指标检验的要求。 3. 采集样品的标记 应对采集的样品进行及时、准确的记录和标记，采样人应清晰填写采样单（包括采样人、采样地点、时间、样品名称、来源、批号、数量、保存条件等信息）。 4.5 采集样品的贮存和运输 采样后，应将样品在接近原有贮存温度条件下尽快送往实验室检验。运输时应保持样品完整。如不能及时运送，应在接近原有贮存温度条件下贮存。 四．菌落总数的测定 1.菌落总数aerobic plate count：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 2. GB 4789.2－2010 菌落总数测定流程 检样25 g(mL)样品+225 mL稀释液，均质 ↓ 10 倍系列稀释 ↓ 选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL 分别加入无菌培养皿内，每皿中加入15 mL～20 mL平板计数琼脂，混匀 ↓36 ℃±1 ℃ ，48 h± 培养，计数各平板菌落数 ↓ 报告 2.菌落计算公式 有两个稀释度的菌落数 在合适范围， 按照如下公式计算： N = ΣC / [n1 + (0.1×n2) ] ×(d) N = 样品中菌落数 ΣC =平板菌落数之和 n1 = 含合适范围菌落数的第一稀释度（低）平板数 n2 =含合适范围菌落数的第二稀释度（高）平板数 d = 第一稀释度（低） 3. 平板计数琼脂培养基 成分 A胰蛋白胨 5.0 B 酵母浸膏 2.5 C 葡萄糖 1.0 D 琼脂 15.0 E 蒸馏水 1000 mL pH 7.0 +/- 0.2 制法 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH.分装试管或锥形瓶，经121℃高压灭菌15min. 五．大肠菌群的测定 1.GB 4789.3－2010大肠菌群计数 a.检样25 g+225 mL稀释液 b.适当十倍稀释样品 c.选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管LST肉汤（每管9 mL LST肉汤并加有导管），每管接种1 mL d.36℃ ，24 ± 2 h ~48 ± e.没有产气管有产气管,报告阴性 有产气管,接种BGLB肉汤管,36 ± ℃，48 ±2h,查MPN表报告结果（大肠菌群）. 有产气管,接种EC肉汤,44.5±0.5 ℃ （水浴培养）,24 ± 2 h ~48 ± 2 h.产气管接种EMB平板（36℃、18~24 h）.从EMB平板上挑取5个可疑菌转接到PCA斜面，进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气,查 2．培养基 Ⅰ .LST 成份 胰蛋白胨或 胰酪胨 20.0 乳糖 5 氯化钠 5 .0 磷酸氢二钾 2.75g 磷酸二氢钾 2.75g 月桂基硫酸钠 0.1g 蒸馏水 1000 mL pH 6.8 +/- 0.2 制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH.分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min Ⅱ、BGLB 成份 蛋白胨 10.0 乳糖 10.0 牛胆粉溶液 200m