筛选靶向肝癌bel-7402adm细胞mdr1基因的高效sirna的实验研究-experimental study on screening high efficiency sirna targeting mdr 1 gene in bel - 7402 adm cells of hepatocellular carcinoma.docx

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2018-07-30 发布于上海
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筛选靶向肝癌bel-7402adm细胞mdr1基因的高效sirna的实验研究-experimental study on screening high efficiency sirna targeting mdr 1 gene in bel - 7402 adm cells of hepatocellular carcinoma

英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称MDRmultidrugresistance多药耐药siRNAsmallinterferingRNA小干扰RNAP-gpP-glycoproteinP-糖蛋白RNAiRNAinterferenceRNA干扰HCChepatocellularcarcinoma肝细胞肝癌ADMadriamycin阿霉素RISCRNA-inducedsilencingcomplexRNA诱导沉默复合物MRPmultidrugresistance—associatedprotein多药耐药相关蛋白LRPLungresistance—relatedprotein肺耐药相关蛋白TNFtumornecrosisfactor肿瘤坏死因子PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应ILinterleukin白细胞介素UTRsuntranslatedregions非编码区PLCprimarylivecancer原发性肝癌GST-πGlutathione-s-transferase-π谷胱甘肽及谷胱甘肽-S-转移酶TOPOⅡtopoisomeraseⅡ拓扑异构酶Ⅱ筛选靶向肝癌Bel-7402/ADM细胞MDR1基因的高效siRNA的实验研究摘要目的筛选出靶向人肝癌多药耐药细胞亚系Bel-7402/ADM细胞MDR1基因的高效siRNA，为逆转肝癌多药耐药提供新的分子靶点。方法设计并化学合成4条靶向MDR1的siRNAs(mdr1si-1、mdr1si-2、mdrlsi-3和mdrlsi-4)，通过Lipofectamine?2000介导转染Bel-7402/ADM细胞株，用RT-PCR检测Bel-7402/ADM细胞MDR1mRNA表达、westernblot检测P-gp的表达和MTT检测细胞对ADM的敏感性，综合评价这4条siRNAs的沉默效果。结果经siRNA干扰后，4条siRNAs均能不同程度逆转Bel-7402/ADM细胞MDR1介导的多药耐药。4条siRNA转染48小时后，mdrlsi-1组或mdrlsi-3组的mRNA的表达水平下降幅度较mdrlsi-4组或mdrlsi-2组差异有统计学意义(P0.05)；转染72ｈ后P-gp蛋白的表达量由低到高依次为mdrlsi-1组，mdrlsi-3和mdrlsi-4组，mdrlsi-2组(P0.05)；mdrlsi-1组对ADM耐药的相对逆转率最高，mdrlsi-3组次之(P0.05)，mdrlsi-4组和mdrlsi-2组的差异无统计学意义(P0.05)。结论相比较其他3条siRNAs，mdr1si-1对人肝癌Bel-7402/ADM细胞MDR1介导的耐药逆转效果最好，其靶序列有望成为逆转肝癌多药耐药新的靶点。关键词MDR；MDR1基因；P-gp；基因沉默；siRNA；Bel-7402/ADM细胞亚系ScreeningHighlyEfficientSequencesofSmallInterferingRNAsTargetingMDR1GeneinHumanHepatocellularCarcinomaBel-7402/ADMCellsAbstractObjectiveScreeninghighlyefficientsiRNAtargetingMDR1geneinmultidrugresistanthumanhepatocellularcarcinomacellsublineBel-7402/ADMcellswillbeusedtoprovidenewmoleculartargetsforthereversalofmultidrugresistanceinhepatocellularcarcinoma.MethodsFoursiRNAs(mdrlsi-1、mdrlsi-2、mdrlsi-3andmdrlsi-4)specificallytargetingMDR1geneweredesignedandsynthesizedwithchemicaltechnique.ThesiRNAduplexeswereusedtotransfectintothehumanhepatocellularcarcinomaBel-7402/ADMcells,mediatedbyLipofectamine?2000.ThesilencingefficacyofthefoursiRNAswasevaluatedwithRT-PCRforMDR1mRNAexpression,westernblotforP-glycoproteinexpression,flowcytometryforadriamycin(ADM)accumulationandMMTforsensitivitytoAD