实验六 肝炎甲、乙、丙意义.ppt

实验六 实验六 一、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）测定 二、分析肝炎标志物检验结果 三、类风湿因子（RF）的测定 四、分析生化全项结果 一、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）测定 乙型肝炎的病原体是乙肝病毒（HBV），由于至今还不能成功地对该病毒进行分离培养，所以，乙肝的诊断主要依赖于乙肝标志物（HBsAg、HBsAb 、 HBeAg 、HBeAb 、抗－HBc)的检测，在大型医院检验科应用PCR技术进行HBVDNA（乙肝核酸）检测，来判断HBV是否复制，乙肝患者传染性强弱。 HBsAg是临床使用最广泛的诊断乙肝的指标。因此，本实验来介绍HBsAg的检测。 常用方法 ★1、ELISA ★ 2 、金标法 结果判断 按照试剂盒确定的Cut-off值判断结果 ELISA测定的“灰区” （可疑结果的含义） 定性酶免疫测定的CUT-OFF值 2、HBsAg 胶体金法 【测定原理】 HBsAg 胶体金法检测试剂条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，试剂条含有被预先固定于膜上测试区（T）和质控区（C）的抗体。 双抗体夹心法 这条带是HBsAg 抗体-HBsAg-金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则测试区（T）内将没有紫红色条带。无论HBsAg是否存在于标本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区（C）内。质控区（C）内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 【操作步骤】 在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂条和血样标本恢复至室温（20℃-30℃）。 1 ． 从原包装铝箔袋中取出试剂条，在1小时内应尽快地使用。 2． 将试剂条插入血清/血浆标本中。注意：血清/血浆标本液面不能超过试剂条的标记线。 3． 等待紫红色条带的出现，测试结果应在15分钟时读取。 30分钟后判定无效。弱阳性标本会在15分钟至30分钟出现T线。 【结果判定】 阳性（+）：两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明：标本中含有乙肝表面抗原（HBsAg）。 阴性（-）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（T）内无紫红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出乙肝表面抗原（HBsAg）。 无效：质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂条已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 金溶胶标记蛋白质，胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点(线)，从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。 注意：测试区（T）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。 【灵敏度和特异性】 HBsAg 试剂条在15 分钟时可检测出5ng/mlHBsAg，30分钟时可检测出1ng/ml HBsAg。 并与ELISA 试剂条比较，实验表明HBsAg 试剂条的灵敏度可达到99.7%，特异性为99.66%。 乙型肝炎病毒 ( Hepatitis B Virus ) 前S抗原 属HBV表面抗原的组成部分，前S1抗原（蛋白）反映病毒的复制，与HBV的传染性有关。前S1抗原检出率以慢型活动性肝炎（乙肝）最高，急性乙肝时，前S1抗原与HBeAg平行存在，比HBsAg消失早，作为反映病毒消除的指标优于HBsAg。前S1抗原与HBV-DNA的相关性优于HBeAg，可作为病毒复制与传染性标志。血清前S1抗原相对含量的变化可以提示HBV的愈后，持续阳性，则预示HBV向慢性化转变。前S1抗原已成为检测乙型肝炎的新指标。 病例分析 2006年3月16日我院检验科检测1名RA患者，其结果 HBsAg(-) HBeAg(-) HBsAb(-) HBeAb(-) HBcAb (-) Pre-S1Ag(+) HBV DNA与大三阳 1. 样本取样有问题，比如溶血、血脂含量高、还有其他许多未明的抑制因子。2. 突变，一般国内试剂盒PCR检测时设计的靶位点都是针对主流的流行株，个别少见毒株或突变的毒株则无法检测。 检验人员通过复查结果正确，在检验报告单上注明建议临床作HBV DNA检查。 理由：将ELISA检测阴性的血清，使用PCR技术检测乙肝核酸，，结果发现，在HBSAg阴性的血清中HBV DNA阳性率占10％，索凤霜等人报道，在295例HBSAg阴性的