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结核病学实验室自动化 副主任技师 谢永平 结核病学实验室自动化 长期以来，结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。由于方法所限，严重影响了结核病的及时诊断。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。 结核病实验室诊断方法和技术 涂片和罗氏培养 快速培养、药敏检测技术 液体变色培养基 噬菌体裂解试验 结核杆菌L型检查 免疫学诊断 分子生物学诊断  涂片和罗氏培养(结核病最基本的细菌学检查方法 ) 快速培养、药敏检测技术 液体变色培养基 噬菌体裂解试验 结核杆菌L型检查 免疫学诊断 分子生物学诊断 涂片和培养 涂片和培养是结核病最基本的细菌学检查方法 明确结核传染源 十分经济 符合国情 涂 片 涂片的优点 ①简便：技术要求低，不需特殊仪器设备 ②快速：当天可得出结果 ③价廉：所耗材料价格低廉 涂片的缺点 ①敏感性低,通常需5000—10000条菌/ml才能 够得到阳性结果; ②特异性差,各种分支杆菌均可着色,需要进一 步鉴定是否为结核分支杆菌; ③无法区别死菌与活菌。 培 养 培养的灵敏度略高于涂片法，并是鉴定活菌的可靠方法，还可进一步进行菌种鉴定和药敏试验，被誉为诊断结核病的“黄金标准”。 常规罗氏培养基培养时间长,需4-8周才能出结果，而且阳性率也只有30-40%;同时各种分支杆菌均可生长, 需结合菌种鉴定才可确定是否为结核分支杆菌 结核病实验室诊断方法和技术 涂片和罗氏培养 快速培养、药敏检测技术(是一种新的结核病细菌学检查方法 ) 液体变色培养基 噬菌体裂解试验 结核杆菌L型检查 免疫学诊断 分子生物学诊断 快速培养、药敏检测技术 Bactec TB 460 Bactec MGIT 960 BBL MGIT 3D 快速培养、药敏检测技术 Bactec TB 460（第一代分枝杆菌快速培养、药敏检测系统） Bactec MGIT 960 BBL MGIT 3D Bactec TB 460 原理:分枝杆菌在含有14C标记棕榈酸的12B培养基中生长、分解利用棕榈酸，产生14 CO2 ，仪器检测系统自动测试14CO2含量,并将其换算成生长指数(GI值)，GI值升高提示有分枝杆菌生长。 如在12B培养基中加入一定浓度的抗结核药物,则可进行分枝杆菌的药敏试验。 Bactec TB 460 优点: 可显著缩短培养时间(涂阳病例平均阳性天数9-14天),药敏试验只需5-7天,同时阳性检出率约提高10％ 操作简便、自动化强,还可进行快速菌型鉴定 缺点: 液体培养基中无法观察菌落形态 污染率高于罗氏培养 仪器与试剂价格较贵 有放射性污染 快速培养、药敏检测技术 Bactec TB 460 Bactec MGIT 960（第二代分枝杆菌快速培养、药敏检测系统） BBL MGIT 3D Bactec MGIT 960 原理:其所使用的培养瓶底部含有包被于树脂上的荧光显示剂,由于该显示剂为氧抑制性，当分支杆菌生长使氧消耗后,荧光显示剂被激活，而发出荧光。检测系统每隔60分钟连续测定培养管内荧光强度,从而判断管内分枝杆菌生长情况。 Bactec MGIT 960 国外：检测2567份临床标本 方 法 960 460 L-J培养法 阳性率（%） 80 85 71 平均报告（天）13.3 14.8 25.7 国内：湖南1449份标本（福州、汕头） 阳性率（%） 32.9 25.5 （29.2 、46.5 ） 污染率（%） 2.3 6.5 阳性报告(天) 14 （8.9、9.8 ） （8.8） Bactec MGIT 960 优点： 无放射性污染、快速、自动化程度更高、操作更为简便 可检测范围广 用于痰、支气管灌洗液、胸水、腹水、脑脊液、尿液、脓液、关节液、病灶组织或干酪块各种临床标本的分枝杆菌培养、初步菌种鉴定和药物敏感试验 缺点： 价格更高、需专门进口厂家专利试剂、专门设备。 快速培养、药敏检测技术 Bactec TB 460 Bactec MGIT 960 BBL MGIT（快速手工培养、鉴定、药敏检测系统） 3D BBL MGIT 分支杆菌快速手工培养、鉴定、药敏检测系统； 该法所用培养