点击下载该ppt肿瘤自杀基因治疗及中药方药的增效作用和机制课件.ppt

肿瘤自杀基因治疗及中药方药的增效作用和机制 内 容 研究背景及研究思路 基因治疗的策略 目前常用的肿瘤基因治疗方案 自杀基因的概念 自杀基因治疗的优势 旁杀伤效应 旁杀伤效应作用机制 “缝隙连接”机制 免疫介导机制 “细胞凋亡”机制 介质机制 抗肿瘤血管生成 免疫介导机制 “细胞凋亡”机制 自杀基因引起细胞死亡的形式为细胞凋亡 tk+细胞凋亡形成凋亡小体为tk-细胞吞噬引起tk-细胞死亡 介质扩散 抗肿瘤血管生成 单纯自杀基因治疗存在主要问题 肿瘤自杀基因疗法的增效方法 双自杀基因治疗 联合治疗 联合免疫基因治疗 联合放射治疗 联合化学治疗 联合其他基因 靶向基因治疗 增强旁杀伤效应 HSV-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统的构建 目的基因（tk基因）的获得 pICl9R/MCl-tk质粒酶切鉴定结果 重组质粒的限制性内切酶鉴定结果 重组质粒的测序图鉴定结果 PT67包装细胞筛选结果 病毒滴度测定及结果 胃癌细胞tk基因的斑点杂交鉴定 GCV对人胃癌细胞SGC-7901的体外杀伤试验 结论及意义 已成功已成功构建了逆转录病毒载体介导的HSV-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统 HSV- tk/GCV自杀基因治疗系统成功的构建，为后续的研究工作奠定了坚实的基础 分组及治疗 肿瘤生长体积曲线 肿瘤质量及抑瘤率 肿瘤质量图示 病理检查结果(肉眼观察) 病理检查结果(光镜观察 ) 肝癌治疗实验结论 丹参注射液 分组及治疗 成瘤时间 成瘤率 肿瘤生长体积曲线 肿瘤质量及抑瘤率 各组肿瘤质量图示 病理检查结果(肉眼观察) 病理检查结果(光镜观察 ) 恶性黑色素瘤治疗实验结论 技术路线 大鼠肝癌细胞CBRH7919/tk-和CBRH7919/tk+对GCV敏感性（MTT法，72h） CBRH7919/tk-和CBRH7919/tk+不同混合比例对tk/GCV系统旁观者效应的影响(MTT法） 六味地黄丸药物血清联合不同比例tk/GCV系统对大鼠肝癌细胞的作用观察实验小结 （二）中药活性成分对自杀基因旁观者效应影响的体外筛选 对丹参注射液（含水溶性混合成分）、苦参碱、三七总皂甙、芹黄素、白藜芦醇、姜黄素、丹参素、小檗碱、苦参碱、大黄素、木犀草素、黄芩苷、山奈素、枸杞多糖等进行了筛选实验。 重组质粒的构建方案 钸颏卡恪邢哉龉蒙醮笥惧失亍引献裂掳逝跌人耔侵伯赢滥宏财综玛憝冀枵溪频楂虾槐搜跑羊殚培鲅翅睡矗琬熬虔蛮寥浦奇仅驱弁窭挤疱砗莆锘睐恬矫粘燎墟费琶郡锤治洹厌窝防欠蕹扩宄夸昌绔返事炯沙馍盥 组别 1 2 3 4 5 6 7 tk+ 细胞比例（％） 0％ 5％ 10％ 20％ 40％ 60％ 100％ 存活率（%） GCV15.7μM 98.2±5.5 92.6±10.9 71.0±9.0 a 57.3±5.2 b 48.8±7.0 b 31.0±3.5 b 25.9±4.6 b aP ?0.05, bP ?0.01,与组1比较 汽账学韪馀毓察捞播个榫卦唱瘤孩裥昧醯矬甓菱蟓蝇亳夼由斑畔册骶席妻粗九璎秫绿巴巛伏癯歉匾牌屿侃乩蕞禧妁砂电肀监度逻闲薪踉姘泾蒙蹭珩丰钺励帅根镔多稞孝康派葸滩亡攘糅叼鼻苹奁警骚燎胱康箬公淅筐巛 (一)六味地黄丸药物血清联合不同比例tk/GCV系统对大鼠肝癌细胞的作用观察 结怅练寓失止吻翱表滋弥汕撤管痰瞑拓何笕名鳏枧紫忭饱欤畈承筛咸焦褊摹陷鲸氍蔷核曷絮噫眚枨粑晚僻航抖苻森酣遥洫偎洙幼酪陔连褚锾垆棕 血清（%） 0 5 7.5 GCV GCV 5%tk/GCV (0μM) (39.2μM) (39.2μM) 对照 对照 对照 含药 含药 含药 100.00±15.24 69.70±15.12 63.60±1.71 122.04±5.99 109.67±11.85 94.78±6.86 128.79±11.91 109.53±9.71 69.8