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医学免疫学实验 免疫学教研室 间接凝集抑制试验 沉淀反应 实验目的 掌握间接凝集抑制试验、沉淀反应的操作及结果的正确观察、判断. 熟悉间接凝集抑制试验、沉淀反应的原理. 了解间接凝集抑制试验、沉淀反应的用途. 间接凝集抑制实验 分类及概念 血清学反应: 在血清中进行的抗原抗体反应. 凝集反应: 在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝块。 注意以下几个方面: 第一: 参与反应的抗原必须是体积较大的颗粒性抗原，比如说细菌、红细胞等，都属于颗粒性抗原的范畴。 第二: 必须是相应的抗原抗体才能发生凝集反应 第三: 必须有电解质的参与 第四: 凝集块是一种肉眼能够见到的细小均匀块状物质。 间接凝集抑制试验 可溶性抗原与相应抗体结合后并不能产生凝集反应，怎样才能用肉眼就能观察到可溶性抗原与相应抗体的结合呢？ 实验原理 间接凝集示意图: 间接凝集抑制示意图: 妊娠免疫诊断试验 孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。（HCG是可溶 性抗原 ） 反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗HCG抗体。 试验材料 1、标本：非孕妇、待检尿 ２、试剂：兔抗人HCG血清、HCG致敏的乳胶颗粒 ３、器材：载玻片、滴管、玻棒 实验方法 加尿液标本 加兔抗人HCG免疫血清 加HCG致敏的乳胶颗粒 观察结果 待检尿 非孕妇尿 混匀静置2分钟 混匀静置2分钟 实验结果 非孕妇尿 出现均匀一致的白色细小凝集物。 待检尿 若出现凝集则为HCG阴性，若仍呈均匀浑浊乳状液则为HCG阳性。 注意事项 在加入抗HCG血清后，一定要将其充分混匀，静置1-2分钟后再进行下一步，这是为了使可溶性抗原与抗体能够充分反应，以免其反应不足造成假阳性。 本次实验中，出现凝集现象的为实验阴性，不出现凝集现象的反而为阳性。 临床意义 人工流产或剖宫术后无胎盘组织残留者，HCG转为阴性。 绒毛膜上皮癌、葡萄胎及睾丸畸胎瘤病人尿中，HCG含量远较正常妊娠尿液为高，将尿液作1∶200稀释后仍可呈阳性反应。 术后可转为阴性，若仍为阳性应考滤手术不彻底或肿瘤已有转移。 沉 淀 反 应 基本概念 沉淀反应：可溶性抗原与相应的抗体结 合，在有适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应的种类可 分为环状沉淀反应、絮状反应和琼脂扩散等。 可溶性Ag ＋ 相应Ab　 肉眼可见沉淀物 电解质 比例适当 分类： 沉 淀 反 应 环状沉淀反应 絮状反应 琼脂扩散 单向扩散 双向扩散 电泳 火箭电泳 对流免疫电泳 ＋ 单向扩散 即将定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔加入抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的比例合适处呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正比，故该试验是定量试验。 双向扩散 即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在二者比例合适处形成白色沉淀线。 电 泳 定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。 原理：蛋白质是一种两性电解质，其具有游离的氨基和羧基，每种蛋白质都具有自己的等电点（PI)，等电点的高低取决于蛋白质的性质，在等电点时，蛋白质带正负电荷相等。在ph ? PI时，羧基解离得多，致使蛋白质带负电荷，向着正极移动。在ph ? PI时，氨基解离得多，带正电荷，向着负极移动。 火箭免疫电泳 单向扩散+电泳：将单向扩散与电泳技术相结合的一种方法。 沉淀峰的高度与抗原的浓度成正比。 对流免疫电泳的原理 蛋白质抗原在碱性环境中，其羧基发生电离而带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。 抗体分子在电场中从正极向负极移动。 实验步骤 制板 打孔 封底 加样 电泳 3－4ml琼脂 孔间距3mm 约7ul 切割火焰2－3次 总电流＝4mA/cm x 2.5cm(板宽) x N(板数）30分钟 抗原 抗体 实验结果 注意事项 抗原抗体不能放反 加样前须封底 样品不能从孔内溢出 电泳时电流大小须合适 实验报告（交单页） 原理 方法 结果 肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，人们日常说的肝癌指的多是原发性肝癌。原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据必威体育精装版统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。原发性肝癌按细胞分型可分为肝细胞型肝癌、胆管细胞型肝癌及混合型肝癌。按肿瘤的形态可分为结节型、巨块型和弥漫型。原发性肝癌在我国属于高发病，一般男性多于女性。中国是乙肝大国，我国的肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展为肝癌。目前我国发病