BD FACSCalibur流式细胞术标准操作规程.docxVIP

BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目 的：规范BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。内容：1. 每日开机程序1.1在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2.检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。1.4打开电脑。1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。1.6做Prime。1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。2. 每日关机程序2.1 用3mlFACSClean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。2.3 将样品管换成蒸馏水重复1-2步。2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。2.5 选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。2.6 退出所有应用软件，关闭电脑。2.7 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。3. 每月维护程序3.1 将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。3.2 旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINE FILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER端口），以防伤害。3.3 将盛有3ml FACSClean洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30分钟。3.4 将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以 HI RUN 60分钟。3.5 将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。3.6 以HI RUN 10-20分钟。3.7 在测定正式样品之前实施每日开机程序。4. FACScomp 自动质控操作4.1 试剂准备4.1.1三色试剂的校正（Cat No：340486）4.1.1.1取四色试剂盒中的Unlabeled试剂，充分混匀，加一滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled。4.1.1.2取FITC、PE、PerCP、unlabeled试剂，充分混匀，各加一滴到第二支装有2ml的鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。4.1.1.3上机进行仪器的校准。4.1.2或四色试剂的校正（Cat No：340486；Cat No:340487）4.1.2.1取试剂盒中的unlabeled试剂和APC试剂各一滴加入到第一支装有1ml鞘液的试管中，混匀。4.1.2.2取5种试剂（FITC、PE、PerCP、APC、Unlabeled）各一滴加入第二支装有2ml鞘液的试管中，混匀。4.1.2.3上级进行仪器的校准。4.2 Calibrite beads FACScomp上机操作的具体步骤4.2.1执行FACSalibur开机程序；4.2.2执行FACScomp软件；4.2.3在运行“Sign in”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单机“Acceppt”；4.2.4进入”Set Up窗口，先看最左侧的Assay selection选项，在里面选中Lyse/Wash或Lyse/No Wash；4.2.5在Calibrite Beads Lot IDS中，根据每种颜色的beads所对应的Lot ids，输入编号，次编号在Calibrite Beads试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是Calibrite BeadsTM3Batch NO，选择FACS Flow Sheath下的编号(右侧的编号)；如做四色校正，同样方法输入Calibrite BeadsTM APC的IDS。4.2.6在右侧的保存选项中文件会自动保存，路径Facstation\BD file\FACSComp\DDMMYY,还可以单击“Location”改变保存路径；4.2.7其他的不要改动，直接单击“run”出现PMT视窗，然后准备好上样管；4.2.8上第一管后单击start，仪器开始自动调节PMT。完成后仪器会在窗口底部出现一行提示：“PMTs set Successfully”，这时软件会暂停5秒，然后自动进入下一个调节窗口(Comp 窗口)；如果是四色微球调试，仪器还会对激光的延迟进行测试，直到仪器电脑屏幕出现提示:“Time Delay Calibration was successful”，然