分光光度法测定北虫草提取物中多糖含量.docVIP

分光光度法测定北虫草提取物中多糖含量 　　摘要:目的:建立北虫草提取物中多糖的含量测定方法。方法:采用将多糖水解成单糖,经与显色剂3,5-二硝基水杨酸试液显色后,在520nm处测定吸收度的分光光度法。结果:虫草多糖在0.0006mg～0.030mg范围内时与吸收值有良好的线性关系,R=0.9992,平均加样回收率为99.54%,回收率的RDS为0.63%（n=11）。结论:该方法操作简便、灵敏、准确、重现性好,适用于虫草多糖的质量控制。 　　目前国内的北虫草人工养殖规模不断加大,北虫草子实体及北虫草培养基中含有多种生理活性物质,其中的虫草多糖是含量最高的,可以占到总干重量的3%～8%[1],虫草多糖具有提高免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、降血糖、抗放射、保护肾脏、抗病毒、降血脂、抗动脉粥样硬化、保肝、耐缺氧等作用[2] [3]。北虫草提取物是以人工栽培的北虫草子实体及北虫草培养基为原料,经水提－醇沉工艺生产所得,为有效控制北虫草提取物的质量,采用分光光度法对北虫草提取物中多糖的含量进行了测定。 　　关键词:分光光度法 北虫草提取物 虫草多糖 含量测定 　　1、仪器与试剂 　　北虫草提取物（黑龙江新医圣制药有限责任公司）;UV754N型可见—紫外分光光度计（上海精密科学仪器）;葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所,批号:110833-200902）;试剂均为分析纯,水为重蒸馏水。 　　2、方法 　　2.1 单糖供试品溶液的制备 　　取本品,研细,精密称取0.8g,置研钵中,加少量水研磨片刻,并用水分次转移至100ml 量瓶中,加水至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。 　　2.2 总糖供试品溶液的制备 　　取本品,研细,精密称取0.8g置研钵中,加少量水研磨片刻,用盐酸溶液（1→2）10ml分次将糊状物转移至烧瓶中,加热回流30分钟,放冷,加40%氢氧化钠溶液调节PH值至中性,移入500ml瓶中,加水至刻度,离心,取上清液,即得。 　　2.3 北虫草多糖含量的测定 　　精密量取对照品溶液与单糖、总糖供试品溶液各1ml,分别置25ml量瓶中,各加3,5-二硝基水杨酸试液2ml,摇匀,置沸水浴中加热5分钟,立即冷却。加水至刻度,取水1ml,同法制成空白溶液,作空白,照分光光度法（中国药典2010版一部附录VA）,分别在520nm波长处测定吸收度,按公式计算虫草多糖的含量,即得。 　　公式: 　　式中:C样:供试品的浓度;C对:对照品溶液浓度; A对:对照品溶液吸收度;A总:总糖供试品溶液吸收度;A单:单糖供试品溶液的吸收度;W总:总糖测定取样量W单:单糖测定取样量。 　　3、结果与分析 　　3.1 线性相关性实验 　　分别精密量取对照品溶液（浓度0.03mg/ml）0.1ml、0.5ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml、4.5ml、5.0ml置50ml容量瓶中,加1.5ml的3,5-二硝基水杨酸试液,混匀,置水浴中加热5分钟,迅速冷却,加水至刻度,摇匀,照分光光度法,在520nm的波长处分别测定吸收度（见表1）,以吸收度A为纵坐标,对照品浓度为横坐标绘制标准曲线（见图1）,计算。 　　回归方程为:Y＝0.0496X+ 17.3021　R＝0.9992 　　线性范围0.0006mg～0.030mg,相关性良好。 　　3.2 测定波长选择与稳定性实验 　　用3,5-二硝基水杨酸测定多糖中还原糖时,在475-486nm及520nm处有两个最大吸收波长[4]。本试验样品加显色剂后放置不同的时间分别在486nm及520nm处测定总糖的A值,比较其稳定性,结果见下表2: 　　3.3 样品水解时间的考查 　　取本品三份,每份0.8g,精密称定,置研钵中,加少量水研磨片刻,用盐酸溶液（1→2）10ml分次将糊状物转移至烧瓶中,分别加热回流10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟,含量结果见下表3。 　　3.4 精密度实验 　　分别取总糖、单糖供试品溶液（批号,连续取样分别测定6次,记录吸收度如下表4。 　　3.5 重复性试验 　　取本品6份（批号,依试验方法测定含量结果见表5。 　　3.6 回收率试验 　　采取加样回收试验法,取本品6份,每份0.75g,精密称定（总糖含量:31.5%）,依试验方法制备供试品溶液,直至水解完成,用40%氢氧化钠中和,在总糖供试液中精密加入葡萄糖对照品溶液1.0ml(0.3mg/ml),进行含量测定,计算回收率见表6。 　　加样回收率（%）=×100% 　　4、讨论 　　(1)北虫草提取物取样后应及时测定含量,不能马上分析时,应放入冰箱保存,否则,由于多糖变质,使分析结果偏低;分析样品时的稀释样,不能放久,由于容量瓶对糖