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关于“使用血球计数板对酵母菌进行计数”问题探讨 　　摘要：“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”是新课标教材“必修3：稳态与环境”中的学生分组实验，需要学生学会使用血球计数板进行准确计数酵母。通过结合“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”这一实验和有关血球计数板的命题的分析，对血球计数板的计数原理和操作方法中遇到一些问题进行探讨。 　　关键词：血球计数板 生物学实验 实验操作 　　中图分类号：G633.91 　　文献标识码：B 　　在人教版高中生物教材中，“探究培养液中酵母菌种群数量变化”只作了基本的原则性指导，对一些操作过程的细节，没有作细化阐述，而这些细节都是实验成功的关键所在。 　　如何正确使用血球计数板对酵母菌种群数量进行计数，是本实验的重点和难点。根据中学实验条件，用显微镜直接计数法相对容易，只要指导学生掌握血球计数板的正确使用便可。但学生对血球计数板结构的认识不够明确，教师也讲解不清晰。而在近年来的高考题或模拟题中多次出现相关的试题，而且不仅从如何计算酵母的数量的角度来考查学生，还从操作方法或操作过程中出现的一些问题以及处理方法来考查学生。而教师在遇到这些问题往往让学生记答案，学生对这些问题仍是感到疑惑。笔者在近年来的教学实践中，将教师和学生在做该实验和相关命题遇到的一些问题，进行了分析探讨。 　　1 血球计数板的构造和计数原理 　　虽然不同版本的教材推荐使用的血球计数板的规格不同，人教版建议使用2mmx2mmx0.1mm方格，苏教版推荐使用1mmx1mmx0.1mm方格，但是血球计数板的使用原理和方法是相同的。以下以1mmx1mmx0.1mm方格的计数板为例分析结构和计数原理。 　　每个血球计数板上有两个计数室（图1）。血球计数板上的符号和数字（图1）的含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板中计数室分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2（计数室边长1mm），分400个小格，每小格面积是1/400mm2（图2），9个大方格中只有中间的有小方格的中央大方格才是计数室。不要认为9个大方格都是计数室。 　　计数室通常也有两种规格：一种是16x25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格（图2）；另一种是25x16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16x25=25x16=400个小方格组成。 　　计数时，若计数室是由16个中方格组成，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100个小方格）的菌数。如果是由25个中方格组成的计数室，除数上述4个中方格外，还需数中央1个中方格（即80个小格方）的菌数（图3）。计数时对压在中格四条线上的细胞只计数相邻两边及其夹角上的细胞（一般选左边和上边的线）。 　　以1minx1mmx0.1 mm方格的计数板为例，如果是25个中格的计数室，计数的5个中格菌数共N个，那么1mL培养液中菌数=N/5x25x10000x稀释倍数。如果是16个中格的计数室，计数的4个中格菌数共N个，那么1mL培养液中菌数=N/4x16x10000x稀释倍数。 　　2 血球计数板操作方法的注意事项 　　教师在介绍血球计数板的操作方法时，往往是比较简略的。学生在操作中因为对操作要求不理解而造成操作不当，或者对操作中出现的异常问题的处理不知如何处理。而通过分析近几年的有关血球计数板的相关试题，更注重操作方面的考查，而教师在这方面对学生分析阐述得少。 　　（1）在取样计数前，为什么要将酵母菌培养液进行振荡摇匀？ 　　因为这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，减小培养液中的酵母菌数量误差。 　　（2）为什么要先在计数室上盖上盖玻片，再滴加菌液？ 　　通常滴加菌液时，采用的是“渗入法”：先将盖片盖住计数室，盖片的两端应搭放在计数室两侧的支持柱上。从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多，一般将滴管口沿盖片边缘与计数平台之间的空隙轻轻靠一靠即可），让菌悬液渗入并充满计数室，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去多余菌液。技巧：用吸水纸吸去多余的培养液时要迅速，保证计数室被培养液充满，以减少误差。 　　但也可采用“压滴法”：先将适量菌液滴加在计数平台上，再将盖片从一侧压到计数扳上，使盖片搭放在两则支持柱上，将菌液滴压平。不管用哪种方法，都必须把握3个原则：加入待测菌液后，计数室内不能产生气泡；不能将菌悬液沾到盖玻片表面，以免污染显微镜的高倍镜头；不能将菌液沾到计数平台两侧的支持柱表面。比较而言，渗入法更容易操作。 　　（3）如果先滴加菌液，再加盖玻片，容易出现什么误差？怎么处理？ 　　如果先滴加菌液，再加盖玻片（压滴法），容易