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第十一章 血清学试验 HYPERLINK /blog/ \l m=0t=1c=fks_087065084083087070080084074075082084083064093085 默认分类 2006-12-03 23:08:04 阅读271 评论0 字号：大中小 第十一章 血清学试验 [内容提要] 血清学试验是体外发生的抗原抗体反应，根据可见的现象判定反应结果。凝集试验用颗粒性抗原，有直接法、间接法等。沉淀试验用可溶性抗原，有环状沉淀、琼脂免疫扩散、免疫电泳等方法。标记抗体技术尤其是荧光抗体与酶标抗体技术发展迅速、应用广泛。荧光抗体标记有直接法及间接法，酶标记抗体技术有免疫酶组化法及ELISA两类。补体结合试验需有补体系统和溶血系统共同参与。中和试验有体内中和试验和体外中和试验之分。各种检测技术的原理、方法及对试验的特别要求应予注意。 第一节 血清学试验概述 一、血清学试验的概念 抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发生的特异性结合反应。它既可以发生在体内，也可以发生在体外。在体内发生的抗原抗体反应是体液免疫应答的效应作用。体外的抗原抗体结合反应主要用于检测抗原或抗体，用于免疫学诊断。因抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。血清学试验具有高度的特异性，广泛应用于微生物的鉴定、传染病及寄生虫病的诊断和监测。 二、血清学试验的特点 （一）特异性和交叉性 抗原抗体的特异性结合是指抗原分子上的抗原决定簇和抗体分子可变区结合的特异性，是由两者之间空间结构互补决定的。抗原与相应抗体的结合具有高度的特异性，主要依靠抗原分子上的抗原决定簇和抗体末端可变区的氨基酸排列和立体构型，只有抗原决定簇的立体构型和抗体分子的立体构型完全吻合，才能发生反应。如抗新城疫病毒的抗体只能与新城疫病毒结合，而不能与其他病毒结合。但较大分子的蛋白质常含有多种抗原决定簇，如果两种不同的抗原之间含有部分共同的抗原决定簇，则发生交叉反应。如肠炎沙门氏菌的抗血清能凝集鼠伤寒沙门氏菌。一般来说亲缘关系越近，交叉反应的程度越高。根据抗原抗体反应高度特异性的特点，在疾病诊断中可用抗原、抗体任何一方作为已知条件来检测另一未知方。 （二）敏感性 抗原抗体的结合还具有高度敏感性的特点，不仅可检测定性，还可以定量检测微量、极微量的抗原或抗体，其敏感度大大超过当前所应用的化学分析方法。血清学试验的敏感性视其种类而异（表11－1）。 表11－1　血清学试验敏感性比较 测定方法 敏感性（每升） 双向免疫扩散试验 ＜1mg 火箭电泳 ＜0.5mg 对流电泳 ＜0.1mg 免疫电泳 ＜5～10mg 凝集试验 1μg 血凝抑制试验 0.1μg 补体结合试验 0.1μg 放射免疫分析法 ＜1pg 酶联免疫吸附试验 ＜1ng 定量免疫荧光分析 ＜1pg （三）可逆性 抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这种结合是可逆的，结合条件为0℃～40℃、pH4～9。如温度超过60 免疫技术中的亲合层析法，常用改变pH和离子强度促使抗原抗体复合物解离，从而纯化抗原或抗体。 （四）反应的二阶段性 第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，此阶段反应快、仅数秒至数分钟，但不出现可见反应。第二阶段为可见阶段，这一阶段抗原抗体复合物在环境因素（如电解质、pH、温度、补体）的影响下出现各种可见反应，如表现为凝集、沉淀、补体结合等。此阶段反应慢、需数分钟、数十分钟或更久。第二阶段受电解质、pH、温度等因素的影响。 （五）最适比例与带现象 大多数抗体为二价，抗原为多价，因此只有两者比例合适时，才能形成彼此连接的大复合物，血清学反应才出现凝集、沉淀等可见的反应现象（ HYPERLINK :8022/showpic_detail.asp?id=41 图11-1）。如果抗原过多或抗体过多，则抗原与抗体的结合不能形成大复合物，抑制可见反应的出现，称为带现象。当抗体过量时，称为前带；抗原过多时，称为后带。为克服带现象，在进行血清学反应时，需将抗原或抗体作适当稀释，通常是固定一种成分，稀释另一种成分。 （六）用已知测未知 所有的血清学试验都是用已知抗原测定未知抗体，或用已知抗体测定未知抗原。在反应中只能有一种材料是未知的，但可以用两种或两种以上的已知材料检测一种未知抗原或抗体。 三、影响血清学试验的因素 （一）电解质 抗原与抗体发生结合后，由亲水胶体变为疏水胶体的过程中，须有电解质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷，水化层破坏，复合物相互靠拢聚集形成大块的凝集或沉淀。若无电解质参加，则不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85%～0.9%（人、畜）或8%～10%（禽）的氯化钠或各种缓冲液（免疫标记技术）作为抗原和抗体的稀释液或