动物生理学Diestion Experiment.docx

专业： 动物科学 姓名： 金乾昂 学号： 3110100290 日期： 2013/5/30 地点： 生物实验中心 装 订 线实验报告课程名称：动物生理学 实验名称：离体肠段运动描记 同组学生姓名：黄斌、施佳斌一、实验目的和要求观察平滑肌的一般特性及某些因素对离体兔肠的作用，并掌握温血动物离体器官的实验方法二、实验内容和原理消化道平滑与骨骼肌和心肌一样，具有肌肉组织的共性，如兴奋性、传导性和收缩性，但消化道平滑肌又有其特点:三、主要仪器设备兔、 水浴锅、 Medlab生物信号采集系统、 麦氏浴皿、 0.1%肾上腺素、 0.01%氯化乙酰胆碱、台氏液 、张力换能器（5g）、 铁架台、 手术剪 、镊子、 手术线等。四、操作方法和实验步骤1. 仪器设备准备： medlab生物信号采集系统：记录方式：记录仪；通道：3，×200 张力换能器，加入台氏液，调节水浴锅内水温至38.5℃，备用.2. 离体肠准备：击昏兔子→打开腹腔→取出十二指肠→置于30℃台氏液中洗去内容物→切取2cm左右肠段（以两端翻卷为好）→以缝针穿线对穿肠段一端固定于通气钩上另一端固定于换能器上。（1）待标本稳定后，记录一段自动收缩曲线，对照曲线。（2）从浴皿侧管加入1滴肾上腺素,记录结果后用38.5℃台氏液冲洗3次，以洗涤或稀释残留的肾上腺素，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行下一项。（3）从浴皿侧管加入1滴氯化乙酰胆碱,记录结果后用38.5℃台氏液冲洗2-3次。（4) 改变温度：降温至30℃或升温至40℃-50℃。五、实验结果与数据处理图一：自动收缩曲线（对照曲线）图二：加入肾上腺素以后，小肠收缩明显受到了抑制，收缩平率下降，兴奋性和张力都变小。图三：加入乙酰胆碱后，最大值，峰峰值变大，说明张力变大；平均值也变大，说明小肠平滑肌兴奋性升高图四：41℃波形：收缩频率增加，但与原对照组对照发现兴奋性和张力的变化不是很明显。这是小肠细胞第二次稳定以后的数值，比第一次数值要升高了很多。内在原因一方面可能在于第一次小肠壁与管壁有摩擦，另一方面原因可能是乙酰胆碱残留作用存在小肠上六、讨论正常：正常情况下，我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩，但其节律性很不规则。它的产生可能与细胞膜上生电性钠泵的活动具有波动性有关，当钠泵的活动暂时受抑制时，膜便发生去极化；当钠泵活动恢复时，膜的极化加强，膜电位便又回到原来的水平；乙酰胆碱：在浴槽中加入0.01%乙酰胆碱1滴后，可见离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩频率变快，幅度增加。出现上述现象的机理与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是Ca2+的内流有关。乙酰胆碱可与肌膜上的M受体结合，使得两类通道开放：一类为电位敏感性Ca2+专用通道，另一类为特异性受体活化Ca2+ 专用通道。前一类通道对Ach敏感，小剂量Ach即引起开放；后一类通道对Ach相对不敏感，只有大剂量Ach才会引起开放。这两类通道开放都使得肌浆中 Ca2+增高，进而激活肌纤蛋白—肌凝蛋白—ATP系统，使平滑肌收缩，肌张力增加；肾上腺素：在浴槽中加入0.01%肾上腺素1滴后，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢，幅度减小以及基线下移。出现上述现象的机理， 目前认为与肠肌细胞膜上存在α和β两中受体，α受体又分为α抑制型受体和α兴奋型受体有关。肾上腺素作用于α抑制型受体，引起肠肌膜上一种特异性受体活化，使K+外流增多，细胞膜发生超极化，肠肌兴奋性降低，肌张力下降。同时，肾上腺素还作用于β受体，①它的激活引起肠肌细胞膜中的cAMP合成增 多，cAMP激活肠肌膜及肌浆网上Ca2+泵活动，使肌浆中Ca2+浓度降低，亦使肌张力降低；②β 受体激活后还促使K+及Ca2+外流增加，加速膜的超极化，促进了肠肌肌张力的减低；在一定范围内的温度升高，能使组织代谢增加，酶活性升高，平滑肌收缩幅度和节律增加。通过实验结果我们发现，与原对照组对比兴奋性和张力的变化不是很明显。但是与加入乙酰胆碱后清洗去向平衡的波形发现，兴奋性和张力均有明显增加，这说明小肠在经历乙酰胆碱以及肾上腺素的作用后，其自身能力均有一定变化甚至缩减。这可能的原因有：乙酰胆碱加入量过大致使小肠收缩能力减退；小肠壁与管壁的摩擦等。七、注意事项1.肠管勿牵拉过紧或过松，且连线必须垂直，且不得与浴槽的管壁、通气塑料管接触，以免摩擦。2. 实验过程中必须保证标本的供氧(通气)及浴槽内台氏液的恒温(38℃)，以维持标本活性。3. 灌流浴槽内的液面高度应保持恒定。4. 放大器零点调好后不要再移动旋钮，以免影响基线。5. 上述各药液加入的量系参考数据，效果不明显者可以添加。6. 每次实验效果明显后立即放掉含药液的台氏液，并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆反应。7．各项处理必须有处理标记。