细胞生物学 - 显微测量和细胞化学成分.pptVIP

* * 细胞的显微测量与化学成分 目的要求 用品材料 实验内容 实验报告 复习预习 细胞的显微测量与化学成分 目的要求 掌握细胞显微测量的方法； 掌握生物大分子在细胞内的存在部位； 熟悉细胞显微测量的原理； 熟悉细胞化学成分的显示原理； 了解细胞内化学成分的检测方法。 细胞的显微测量与化学成分 用品材料 实验器材 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、酒 精灯、火柴、刀片、小烧杯、剪刀、镊子、吸管、吸水纸 实验试剂 碘液、乙醚、95%乙醇、甲基绿-派洛宁液、2 %过氧化氢 液、5 %三氯醋酸液、联苯胺混合液、1 %番红液、0.1 % 酸性固绿液、0.1 %碱性固绿液、0.5 %硫酸铜液 实验材料 蛙血涂片、动物肝糖原切片、马铃薯、蟾蜍、小鼠 细胞的显微测量 细胞的化学成分 细胞的显微测量与化学成分 实验内容 细胞的显微测量与化学成分 实验内容 第一部分 细胞的显微测量 返回上一层 细胞的显微测量需要以目镜测微尺来进行，但其分度值随着放大倍数的变化而变化，长度也不一样，因此需要事先进行标定。而镜台测微尺的长度是已知的，目镜测微尺的标定是通过镜台测微尺来进行的。 0.01mm 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 5 6 7 8 目镜测微尺 (长度随放大倍数发生改变) 镜台测微尺 (每一大刻度值为0.1mm，小刻度值为0.01mm) 目镜测微尺与镜台测微尺 目镜测微尺的标定 放镜台测微尺于载物台 调节使镜台测微尺与目镜测微尺平行 取下镜台测微尺 *装入目镜测微尺 记录二者在重合线之间的刻度 计算标定值 如在低倍镜下重合线之间目镜测微尺的长度为50格 镜台测微尺的长度为68格 则： 50:68=1:x x=1.36格，即目镜测微尺的1小格相当于镜台测微尺的1.36格，而镜台测微尺每1小格的长度为10um，则目镜测微尺每1小格的长度为13.6um。 标定时必须严格按照操作规程，以免损坏测微尺； 重合线的判断应在二者刻度线完全重合； 比例式的计算； 标定值只能在同一放大倍数下进行测量。 标定时应注意的问题 蛙红细胞的显微测量 目镜测微尺 短轴 长轴 转动目镜镜筒 细胞的显微测量与化学成分 实验内容 第二部分 细胞的化学成分 返回上一层 细胞内多糖物质的观察 细胞内DNA/RNA的显示 酸性、碱性蛋白的显示 细胞内过氧化氢酶显示 细胞内多糖物质的显示 植物淀粉有直链淀粉和支链淀粉之分，遇碘液显示蓝色反应，加热时蓝色消失，冷却时蓝色又重新出现。蓝色的产生是由于直链淀粉遇碘形成不稳定的蓝色化合物——碘化淀粉的缘故。 取载玻片 徒手切片 碘液染色 盖盖玻片 镜检观察 马铃薯块茎内淀粉显示(示意图) (蓝色或蓝紫色，颗粒大小不一) 小鼠细胞内的肝糖原 (紫红色，PAS反应) 细胞内多糖物质的显示 细胞内DNA/RNA的显示 细胞化学方法显示细胞内的DNA和RNA有两种方法：Bratchet反应和Feulgen反应。本实验主要介绍Bratchet反应。Bratchet反应显示细胞内的DNA和RNA是通过Unna试剂来实现的。 Unna试剂 甲基绿(绿色) 派洛宁(红色) ? ? DNA RNA 取载玻片 血涂片 室温晾干 酒精固定 室温晾干 Unna染色 水洗晾干 镜检观察 蟾蜍红细胞内DNA、RNA的显示 (红色区域示RNA，蓝色示DNA) 细胞内酸性/碱性蛋白的显示 以酸性氨基酸为主要成分的蛋白质为酸性蛋白；以碱性氨基酸为主要成分的蛋白质为碱性蛋白。细胞核内有组蛋白(碱性蛋白)及少量酸性蛋白，细胞质中主要为酸性蛋白，标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同pH值的固绿分别染色，使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白显示出来。 蟾蜍细胞内酸性蛋白的显示(pH2.2固绿染色) 蟾蜍细胞内碱性蛋白的显示(pH8.0固绿染色) 蟾蜍红细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的显示 (绿色分别示酸性和碱性蛋白在细胞内的存在部位) *