白芍总苷对小鼠接触性皮炎作用及机制研究.docVIP

白芍总苷对小鼠接触性皮炎的作用及机制研究 前 言 接触性皮炎是皮肤、粘膜单次或多次接触外源性物质后，在接触部位甚至以外的部位发生的炎症性反应[1]，是皮肤科常见病、多发病，包括由化学性刺激引起的刺激性接触性皮炎和Ⅳ型变态反应引起的变态反应性接触性皮炎。刺激性接触性皮炎是指接触物对皮肤有很强的刺激性，任何人接触后均可发生皮炎；变态反应性接触性皮炎是指接触物基本上是无刺激性的，少数人在接触该物质致敏后，再接触该物质，经12-48h在接触部位及其附近发生皮炎。 变应性接触性皮炎是由T细胞介导的抗原特异性皮肤过敏反应，以抗原刺激后局部皮肤出现一系列的皮肤炎症细胞浸润、炎症介质释放为特征。不少文献肯定了Ⅰ型T淋巴细胞(包括CD4+Th1细胞和CD8+Tcl细胞)因子在变应性接触性皮炎病变过程中的作用，但近来也有不少文献指出，Ⅰ型/Ⅱ型(包括CD4+Th2细胞和CD8+Tc2细胞)T淋巴细胞因子的动态改变，影响了变应性接触性皮炎的发展和转归。细胞因子可以活化局部内皮细胞，趋化淋巴细胞，上调主要组织相容性复合体(MHC)、协同刺激因子和黏附分子的表达，在变应性接触性皮炎的发生、发展和转归中起重要的作用[2,3]。 在变应性接触性皮炎发病中，I型细胞因子TNF-α起重要作用。TNF-α基因敲除的小鼠或者应用TNF-α中和抗体，均不能够产生明显的变应性接触性皮炎反应[4]。TNF-α对LC从表皮向回流淋巴结的移动和回流淋巴结内树突状细胞的聚集起主要的作用[3]。TNF-α还是重要的炎症前介质，可以诱导炎症反应中多种细胞因子的产生、黏附分子(如ICAM-1)和协同刺激因子的表达[5,6]。也是诱导NF-κB活化的重要细胞因子[7]。 NF-κB是一类能特异性地识别结合DNA的Rel类蛋白质二聚体转录因子[8]。NF-κB可能作为始发炎症反应的上游环节在疾病中起重要作用。NF-κB作为一种促进基因转录的核转录因子，参与调节、控制免疫反应及其进程的信号传导途径；各种体内、外因素如各种微生物及病毒的代谢产物、炎性细胞因子、T细胞及B细胞的表面分子等均可使其活化[9]。活化的NF-κB参与机体多种蛋白、酶及细胞因子的基因转录[10]、免疫与炎症反应的调节过程，如抗原递呈、T与B细胞的激活及类型转换以及免疫平衡的稳定。NF-κB通过对白细胞介素-1β（IL-1β），IL-2， IL-6，肿瘤坏死因子(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶( iNOS )、环加氧酶-2(COX-2 )、细胞间黏附分子-1( ICAM-1)等诱导性调节作用参与免疫细胞的增殖、分化及免疫应答。此外，免疫细胞内NF-κB活性的改变还直接影响免疫细胞的活化、增生和凋亡。因此NF-κB的激活就可以作为炎性反应的触发器及关键环节，诱导机体一系列炎性反应因子的产生[9]，最终导致炎性病理损伤。 CD1a是郎格汉斯细胞（Langerhans cells，LC）的标记性分子，而LC的抗原递呈功能在变应性接触性皮炎的发病过程中起重要的作用。 在变应性接触性皮炎发病过程中，每种细胞因子的作用都不是单一的，对变应性接触性皮炎的抑制或者促进作用也不是绝对的。各种细胞因子之间可以通过合成分泌相互调节、受体表达相互调控、生物学效应相互影响，从而调节变应性接触性皮炎病理过程的进展和转归。 治疗变应性接触性皮炎的方法是在识别致病原的前提下，去除或避免再次接触致病原。然而在实际治疗中致病原往往难以发现，或者由于变应性接触性皮炎患者有时不能圆满改善他们与变应原接触的现状，也不能随意改变工作种类，于是应用皮质激素治疗成为首选，但皮质激素的不良反应限制了其推广和应用。 白芍为芍药的干燥根，白芍总苷( total glucosides of paeony，TGP)为白芍中提取的有效成分，主要含有芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜苷类化合物。白芍总苷的药理及临床研究发现，白芍总苷具有止痛、抗炎、保肝，以及多途径抑制自身免疫反应等多种药理作用，对类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫病有确切疗效。现代药理研究证实，TGP可抑制大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α，IL-1β，IL-2，No，产生抗炎作用[11]。 为了了解白芍总苷在变应性接触性皮炎治疗中的作用及可能产生的作用机制，本研究通过建立小鼠变应性接触性皮炎模型，观察白芍总苷对小鼠变应性接触性皮炎大体形态变化和组织病理学改变，通过测定细胞因TNF-α的水平以及观察NF-κB、CD1a在小鼠耳组织中的表达，初步探讨白芍总甘治疗变应性接触性皮炎的可能性及作用机制。 材料和方法 1材料 1.1动物 实验用小鼠为扬州大学医学院动物中心提供的昆明小鼠42只，雌雄各半，6-8周龄，体重25-30g。等级：清洁剂。小鼠饲养于金属笼中，随意饮食、饮水，周围温度20℃,湿