多重PCRLDRUA的体系检测食品中植物源性转基因成分.pdfVIP

多重PCR—LDR—UA体系检测食品中植物源性转基因成分 Detectionof modified infood geneticallyorganisms with detection usingmultiplex——PCRcoupledligation reaction／universal array 博士后：刘晓蕾 合作导师：乐颖影 2010年10月 目 录 摘要…………………………………………………．．……………………I Abstract………………………………………………………………………………………．．III 第一章绪论………………………：……………………………………．1 1 转基因基因水稻的分类…………………………………………2 1．1抗除草剂转基因水稻………………………………………．2 1．2抗虫转基因水稻……………………………………………．2 1．3抗病害转基因水稻…………………………………………．4 1．4抗逆转基因水稻……………………………………………．5 1．5提高品质转基因水稻………………………………………．7 2转基因水稻的安全性问题及其检测……………………………7 2．1ELISA法………………………………………………………………………．．8 2．2PCR法……………………………………………………………………………8 2．3基因芯片法…………………………………………………．9 3 结语…………………………………………………………………………．．10 参考文献……………………………………………………………．10 第二章多重PCR．LDR-UA体系检测食品中植物源性转基因成分…16 1 转基因作物样本的收集………………………………………．．17 2转基因植物DNA制备及方法优化……………………………．．18 3 多重PCR反应条件的优化及反应特异性分析…………………18 4进行连接酶检测反应(LDR)反应并优化反应条件………．．22 5基因芯片寡聚核苷酸探针的设计、合成及芯片制备………．．22 6芯片杂交………………………………………………………．．24 7讨论…………………………………………………………………………………．27 主要参考文献………………………………………………………28 第三章附录…………………．J…………………………………………34 摘要 食品安全是关系我国国民生命健康和生活质量的大事。随着转基 因工程的发展，将有越来越多的转基因植物和动物被批准进入商品化 生产，转基因食品的出现已经给人们带来巨大的经济效益，并且与人 们的日常生活日益相关。但是，由于转基因食品发展时间较短，人们 对食品安全的要求也越来越来，其安全性受到人们的广泛关注，这就 从客观上要求研究准确高效的方法来检测食品中的转基因成分。 目前国际上对转基因成分的检测主要采用PCR法，以及在此基 础上发展出的实时定量PCR法及多重PCR法。但是，PCR的方法具 有假阳性率较多的缺陷，这就需要提高PCR后检测的精确性。芯片 杂交技术是近年来发展较快的基于生物传感器技术的检测方法，具有 高效、精确等优点。目前国内基于生物传感器技术的食品有毒有害物 质的检测基本还是空白，国外也是近年刚刚建立。但是国外利用此类 技术所检测的大多是己知的商品化的转基因食品成分中的几种，主要 是抗虫、抗除草剂成份，对于正在研发阶段的抗逆、品质改良、生长 发育等转基因植物成分的检测则基本未涉及。本研究以我国研发最多 的转基因水稻为例，建立了检测食品中植物源性转基因成分的多重 PCR—LDR—UA技术，该检测技术具有高效、快速、灵敏、特异的 优点。对于转